兔肢体差速搬移延长血清VEGF的表达与骨痂形成相关性的初步研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhouyiai1015
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目的:研究不同速率骨搬移延长新西兰大白兔胫骨过程中血清中VEGF(vascular endothelial growth factor)的表达情况,并结合组织学和影像学探讨搬移速度与骨痂形成的关系,探究VEGF是否具备调控搬移速度的潜能。方法:运用Rauch F等改良的兔胫骨骨搬移延长方法建立兔胫骨骨搬移延长动物模型。实验由两部分构成:第一部分,血清VEGF表达水平和放射学检测。将48只新西兰大白兔用数字表法随机抽出12只,分为A、B、C、D四组;A组为对照组共3只:胫骨中段截骨5mm后外固定支架固定,B组3只:胫骨中段截骨,经过5天潜伏期后以0.5mm/d速度搬移;C组3只:胫骨中段截骨,经过5天潜伏期后以1.0mm/d速度搬移;D组3只:胫骨中段截骨,经过5天潜伏期后以1.5mm/d速度搬移,除对照组外,每组兔子胫骨最终骨搬移延长30mm,B、C、D组于术前、潜伏期第5天、骨搬移延长至6mm、12mm、18mm、24mm、30mm、固化期第10天、固化期第20天、固化期第30天,10个时间点抽取外周静脉血,ELISA检测血清VEGF表达水平,并作放射学检查评估搬移间隙或骨缺损区骨痂形成情况。A组的抽血时间、放射学检查时间与C组一致;第二部分,组织学检测。将剩下的36只新西兰大白兔随机分成4组,每组9只,A组为对照组:胫骨截骨5mm后外固定支架固定,B、C、D为不同搬移速度实验组,胫骨截骨,在潜伏期5天后分别以0.5mm/d、1mm/d、1.5mm/d的搬移速度搬移延长胫骨,各搬移组分别在潜伏期第5天、骨搬移延长至6mm、12mm、18mm、24mm、30mm、固化第10天、固化第20天、固化第30天,9个时间点随机处死1只兔子取胫骨截骨间隙或骨搬移间隙做HE染色。A组兔子处死时间同C组。数据用Excel数据录入,采用SPSS25.0软件进行统计学分析,该实验的数据均为计量资料。血清VEGF值、骨密度值、骨矿含量组间采用重复测量方差分析,其相关性用Spearmen相关性分析。结果:A组与C组血清VEGF的ELISA检测结果显示:A组术后血清VEGF浓度逐渐升高,术后17天到达到最高水平(术前的138.73%),随后浓度逐渐下降,搬移期结束后降至术前稍高水平,平均值为552.42±8.64ng/L;C组血清VEGF浓度术后也逐渐升高,峰值(术前的171.74%)出现在术后第17天(12mm),搬移期间维持在较高水平,直至搬移结束,平均值为655.32±11.76ng/L,较A组升高了102.91(95%CI:57.80-148.00)ng/L(P0.05)。双能X线定量骨密度测定显示各搬移组在搬移至6mm后骨密度开始增加,B组骨密度增加速度最快,搬移后期骨密度稍有回落,固化后期再次升高,均值为0.159±0.007g/cm~3,C组骨密度增加速度次之,搬移后期也有所回落,固化后期平缓增加,均值为0.132±0.004g/cm~3;D组骨密度平缓上升,搬移期间明显低于B、C两组组,固化后期增加明显,均值为0.093±0.002g/cm~3,B、C、D组间骨密度差异有统计学意义(P0.05),各检测点血清VEGF浓度与骨矿含量无明显相关(P>0.05)。X射线结果显示A组对照组在术后第11天可见原始骨痂,而后骨痂量逐渐增加,术后29天截骨端有骨痂连接,术后35天骨痂填充骨缺损间隙。B组在搬移至6mm(术后17天)开始出现原始骨痂,搬移12mm(术后29天)至30mm(术后65天)可见骨痂逐渐增多,骨痂由两截骨端向搬移间隙生长,术后75天,骨痂填充搬移间隙。C组在搬移至12mm(术后17天)可见骨痂形成,并逐渐增多,骨痂同样由截骨两端向搬移间隙生长,术后45天骨痂填充搬移间隙,各检测点骨痂含量比B组少。D组在搬移至18mm(术后17天)可见少量骨痂形成,骨痂填充间隙缓慢,骨痂形成速度明显少于相同检测点的B组和C组。HE染色结果显示A组术后11天开始出现软骨细胞,并可见大量排列紊乱编织骨形成,术后17天骨膜下可见部分新生骨痂形成,成骨细胞向骨细胞转化,术后29天骨痂连接成片,缺损间隙可见少量软骨细胞,软骨骨痂被新生骨小梁代替。B组搬移至6mm(术后17天)出现部分编织骨及胶原纤维,搬移至12mm(术后29天)可见部分骨痂连接,搬移间隙仍可见大量软骨细胞。搬移至18mm(术后41天)可见骨痂连接成片,可见少量新生血管。C组搬移至12mm(术后17天)可见少量编织骨,较同监测点的B组少,成骨细胞向骨细胞转化,搬移间隙可见大量软骨细胞。D组搬移至12mm时截骨段可见大量间充质细胞及纤维组织,搬移至24mm可见编织骨,其间可见大量胶原纤维,D组各监测点骨痂量均少于B、C两组。结论:1.本实验中兔胫骨骨搬移的最适合搬移速度为1mm/d。2.实验证实兔胫骨搬移延长过程中可刺激机体产生VEGF,并在搬移过程中呈持续高表达状态。3.实验发现不同速度搬移兔胫骨后血清VEGF浓度平均水平无明显差异,因此我们暂时认为血清VEGF并不具备调控搬移速度的潜能。4.实验发现差速搬移兔胫骨血清VEGF表达与骨痂形成无明显相关性。
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