在病毒免疫过程中,不仅需要体液免疫,而且需要细胞免疫。如在新城疫的免疫方面,细胞免疫与体液免疫协同发挥作用。Ghumman(1976)等发现,接种新城疫活苗和灭活苗后2-3天,就能检测到淋巴细胞内DNA合成增加。Agrawal(1991)等用白细胞游走抑制试验来评价接种ND疫苗后细胞免疫反应,发现接种后确实存在细胞免疫反应。机体针对新城疫的细胞免疫和体液免疫之间究竟是怎么变化的呢?为什么经常出现免疫失败呢?这些问题没有明确的答案。酶联免疫斑点检测技术(ELISPOT)结合了细胞培养技术与酶联免疫吸附技术(ELISA)的长处,能够分析经特异抗原活化后分泌细胞因子(如IFN-γ、TNF-α等)的单个效应细胞的频数,具有敏感、特异、易于重复的优点。本研究将ELISPOT技术应用于新城疫细胞免疫的研究,通过对脾淋巴细胞浓度,培养时间,抗原刺激量进行选择,建立了检测NDV诱导特异性IFN-γ、IL-4的ELISPOT方法。结果显示,试验的特异性与培养时间和刺激抗原密切相关,在一定范围内,培养时间越长、刺激抗原越多,试验的特异性越低,当抗原量为5ug/孔,培养时间为7h时,试验的特异性最强。ELISPOT斑点数,随细胞浓度的增加而增加,当小鼠的脾淋巴细胞浓度为106/孔时,最有利于斑点的计数,试验误差最小。用建立的ELISPOT方法对NDV免疫小鼠的IFN-γ、Il-4水平进行检测发现,IFN-γ、Il-4与血清抗体的产生存在着一定的时差关系,在血清抗体阳性检出的前期,IFN-γ的分泌降至最低水平,Il-4升至最高水平。