能量限制及高脂饮食对大鼠卵巢寿命的影响及SIRT1和SIRT6蛋白的表达

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目的:能量限制(CR)能延长哺乳类寿命和抑制卵巢发育。Sirtuins在CR延长寿命的机制中起着重要作用。然而,CR延长卵巢寿命或者影响卵巢卵泡发育的程度却很大程度尚不清楚。所以我们探讨不同程度能量限制及高脂饮食方法对卵巢卵泡库存的影响。  方法:48只体重200±18g的8周龄成年雌性SD大鼠在适应2周后被随机的分成四个饮食组:A、正常对照组(NC):自由进食标准大鼠饲料;B、限制25%能量饮食组(MCR):进食量为同期对照组的75%;C、限制45%能量饮食组(SCR):进食量为同期对照组的55%。D、高脂组(HF):自由进食高脂饲料(10%猪油,3%蛋黄,1%胆固醇,0.5%胆酸盐,85.5%粉末大鼠饲料);每笼一只,自由饮水。每天给予阴道涂片观察大鼠动情周期并记录进食量。限食2个月后,将大鼠麻醉后从心脏抽血,断头处死大鼠,剖开腹腔,称大脑、肾脏、肝脏、心脏、卵巢和腹部脂肪的重量。取卵巢组织进行切片,HE染色观察并分别计数7张有代表性的组织切片中存活和闭锁的卵泡数以及存活卵泡中各级卵泡数占存活总卵泡数的比例。所有数据以x_±SEM表示,组间比较用方差分析和卡方检验。通过免疫组化来检测SIRT1和SIRT6在卵巢各类卵泡细胞中的表达与定位。通过免疫印迹法来测量卵巢中SIRT1和SIRT6蛋白的表达。  结果:组织学分析提示了CR25%和CR45%的大鼠卵巢比起对照组大鼠有更高比例的原始卵泡和更多的健康卵泡,而HF组与对照组相比没有显著的差异。免疫组织化学分析提示了SIRT1和SIRT6蛋白在卵母细胞中的胞浆和胞核中表达。CR25%增加SIRT1和SIRT6在卵巢中的表达,而CR45%和HF食物导致了SIRT1表达下降。CR45%饮食对SIRT6表达水平没有影响,HF组SIRT6水平比起NC组轻微下降。  结论:能量限制尤其是中等水平的能量限制,通过抑制原始卵泡发育启动,减少每个周期成熟卵泡的个数来减少卵泡消耗,可能促进卵泡的库存,有益于生殖寿命延长。SIRT1和SIRT6在延长女性生殖轴功能可能起着重要的作用。
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