肝癌一种是常见的恶性肿瘤,致死率高。因而,急需寻找新靶点,进行创新药物的开发。癌症的发生发病与人体细胞内多个信号通路的异常密切相关。而Hippo信号通路在个体发育,器官生长中发挥重要作用,尤其与肝癌的发生有着密切联系。该通路通过上游信号级联系统调控YAP蛋白不同位点的磷酸化过程,调控YAP蛋白进入细胞核,然后与TEAD等转录因子结合,进而激活受其调控的基因。其中Hippo通路下游转录因子中的CTGF的过表达会明显引发器官的过度生长,引发癌症。因此,CTGF的表达水平可以反映YAP/TEAD的转录活性。于是我们首先,构建靶向YAP/TEAD转录活性的高通量筛选模型,并进行化合物的筛选。将CTGF基因的启动子区域插进pGL4.17[Luc2/Neo]的多克隆位点,构建pCTGF-Luc质粒。将该质粒转染进HepG2细胞后,通过G418筛选可以稳定表达萤火虫荧光素酶的细胞株,构建稳转细胞系。并对750个不同来源的植物提取物以及海洋菌群次生代谢产物进行了筛选,并从中筛选出了有明显抑制作用的化合物C2071和N60以及具有明显促进作用的化合物C10,为后续开展功能实验奠定了基础。其次,筛选化合物的功能实验。在所筛选出的化合物中,化合物C10可以提高荧光值,即可促进CTGF表达,虽然不能作为抗癌症药物,但可以作为潜在的促进组织再生的药物先导物;而化合物C2071,N60可以明显减低荧光值,可降低CTGF的表达。再通过WB找出最适合的肝癌细胞系。之后对这些化合物检测了其抗癌症细胞增殖,迁移,侵袭的能力,初步证明了化合物对Hippo通路异常活化的肝癌细胞具有选择性细胞毒性,而对正常细胞没有明显细胞毒性。最后,化合物的抗肿瘤作用机制研究。通过WB,qPCR确定了化合物可以抑制Hippo通路下游重要的转录因子CTGF表达,流式细胞仪进一步检测了其对细胞凋亡和细胞周期的影响。推测化合物可以通过作用于Hippo通路来产生抗癌的效果。