[目的]研究发现,CXCR4核转移与肾癌转移相关,本实验旨在探索在SDF-1刺激下引导CXCR4转移至细胞核的关键核定位序列,为寻找抑制肾癌转移的物质奠定理论基础,进一步补充SDF-1/CXCR4生物轴的信号通路机制内容。[方法]利用核定位序列预测软件PSORTⅡPrediction (http://psort.ims.u-tokyo.ac.jp)进行CXCR4核定位序列在线分析,推测CXCR4的可能核定位序列。以EGFP-CXCR4全长序列为模板,应用over-lapping PCR、酶切等方法获得CXCR4核定位序列缺失的目的片段。将目的片段连接至pGEM-Teasy载体,酶切鉴定正确后与EGFP-N1分别进行酶切,将酶切产物连接,得到核定位序列缺失的EGFP-CXCR4突变体。将构建成功的突变体以及作为对照组的EGFP-CXCR4全长序列质粒和EGFP-N1空载体质粒分别转染人肾胚293细胞,分别加入SDF-1刺激24小时,同时设立不加SDF-1刺激组。光谱激光扫描共聚焦显微镜观察不同质粒在人肾胚293细胞内的定位情况,从而判断软件预测的核定位序列的准确性。[结果]1.核定位序列软件预测结果显示：CXCR4的核定位序列位于氨基酸序列的第146位开始的RPRK,即cDNA序列：AGGCCAAGGAAG;2.构建的EGFP-CXCR4突变体经酶切及测序鉴定,无碱基突变和读码框偏移,质粒构建成功；3.光谱激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示：转染人肾胚293细胞并加入SDF-1刺激24小时后EGFP-CXCR4全长质粒转移至细胞核内,而EGFP-CXCR4核定位序列缺失的突变体未转移至细胞核内。[结论]1.CXCR4的核定位序列位于氨基酸序列的第146位开始的RPRK,与核定位序列预测软件分析结果相符合；2.阻断CXCR4的核定位序列可能有助于抑制肾癌细胞的转移；3.为进一步研究阻断CXCR4核定位序列进而抑制肾癌转移提供理论基础。