餐厨垃圾源黑水虻抗菌肽抑制海洋弧菌的研究

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luyunlongal1127
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黑水虻幼虫(BSFL)生物转化技术是一种新型的餐厨垃圾处理技术。然而,尽管BSFL是一种极具研究价值的天然抗菌肽(AMP)的来源,但是对餐厨垃圾处理后的BSFL产生的AMP的抑菌活性和转录组表达研究较少,尤其在黑水虻AMP对水产养殖病害菌副溶血性弧菌(VP)的抑制作用和抑制机理方面鲜有研究。本研究从以下两方面探究黑水虻AMP对VP的抑制效果。一方面,以餐厨垃圾为处理对象,以碳氮比(C/N)调节为主要调控方法,研究不同C/N(21:1-10:1)条件下,黑水虻抗菌肽的产率、提取方法、体外和体内抑菌活性,以及转录组层面的抗菌肽基因家族表达规律。结果发现,酸提法提取的抗菌肽活性优于碱提法。不同C/N条件对垃圾减量化率和虫产率有显著影响,C/N21:1-16:1的条件优于C/N14:1-10:1的条件。借助半数抑菌浓度(IC50)、最小抑菌浓度(MIC)、抑菌透明圈(DIZ)的检测结果,发现C/N16:1抗菌肽优于其他C/N条件,具有显著抑制VP的能力。模式动物斑马鱼的体内抑菌实验证明,C/N16:1抗菌肽具有与抗生素磺胺间甲氧嘧啶相当的抑菌能力,可将VP感染后的斑马鱼96 h存活率从0%提高到39%。转录组分析比较C/N16:1和C/N21:1发现,溶菌酶基因是抗菌肽基因家族中表达丰度最高的基因,C/N16:1因为显著上调了51条溶菌酶基因中12条基因的表达,所以表现出显著较强的抗菌肽抑菌活性。另一方面,以黑水虻抗菌肽特异性诱导菌株为研究对象,通过纯培养菌株诱导黑水虻产生抗菌肽,借助抗菌肽体外抑菌能力的比较,发现特异性诱导菌的种属,进一步辅以转录组测序,说明菌株对抗菌肽基因家族的诱导表达特征,揭示非致病菌诱导黑水虻表达抗VP的抗菌肽的机理。结果显示,在10株纯培养菌株中,共发现了4株显著强效诱导菌株,分别是枯草芽孢杆菌(BS)、鲁梅利杆菌(RS)、植物乳酸杆菌(LP)和嗜热链球菌(ST),1株显著弱效诱导菌株,为粪肠球菌(EF)。在转录组的比较分析和基因表达通路分析中发现,不同菌株对抗菌肽基因家族的诱导表达呈现显著特征,其中BS和ST显著提高了溶菌酶基因家族的表达,LP、RS以及VP显著提高了杀菌肽和防卫素基因家族的表达,而EF则同时下调了多项溶菌酶基因的表达,这说明溶菌酶、杀菌肽、防卫素的表达丰度与抗菌肽抑菌活性显著正相关。上述结果表明,从餐厨垃圾中提取的BSFL是一种可靠的抗菌蛋白来源,对VP的抑菌效果极佳,本文对揭示黑水虻AMP的作用机理和特异性表达有重要意义,也为促进黑水虻AMP在水产动物致病菌防控中的应用奠定了基础。
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