新城疫病毒HBNU/LSRC/F3与Mukteswar、LaSota株抗肿瘤效果的比较及其病毒HN基因的研究

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新城疫病毒(NDV)为副粘病毒科副粘病毒属,为单股负链RNA病毒,于1927年首次分离并命名。NDV能感染多种人类肿瘤细胞,并能够特异性杀伤肿瘤细胞,但对人正常细胞无杀伤作用。食管癌是一种侵袭性很强的恶性消化道肿瘤,其对传统的放疗、化疗以及外科手术只是姑息性治疗,而无法彻底根治恶性肿瘤,并且副作用较大。本实验研究比较3株NDV(Newcastle Disease Virus,NDV)(弱毒株HBNU/LSRC/F3株、中等毒力Mukteswar株、弱毒株LaSota株)对人食管癌ECA109细胞的诱导凋亡作用。实验分HBNU/LSRC/F3株组、Mukteswar株组、LaSota株3株组和对照组。NDV经扩增后感染ECA109细胞,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法研究NDV对ECA109细胞的抑制率,激光共聚焦显微镜观察经NDV感染双染后的ECA109细胞的凋亡情况,流式细胞术检测其早期凋亡率,DNA ladder法检测其凋亡情况。设计特异性引物扩增出HBNU/LSRC/F3株的HN基因序列,并分析3株NDV的HN基因,比较核苷酸同源性。CCK-8提示3株NDV都能诱导肿瘤细胞凋亡。流式细胞仪检测HBNU/LSRC/F3株的早期凋亡率为(21.32±0.44)%,Mukteswar株和LaSota株的早期凋亡率为(22.27±0.23)%和(14.32±0.61)%,组间比较P<0.05;激光扫描共聚焦显微镜结果显示,HBNU/LSRC/F3株和另外两株NDV处理后的ECA109细胞均出现了凋亡现象,但是HBNU/LSRC/F3株处理过的ECA109细胞荧光强度和着色细胞数量明显多王LaSota株;DNA ladder结果IBNU/LSRC/F3(?)和另外两株NDV处理过的ECA109细胞DNA电泳均出现了梯状条带。比较3株NDV的同源性,核苷酸同源性在之间88%-91.8%,氨基酸同源性在90.2%-93.3%之间。因HBNU/LSRC/F3株抑制率远高于LaSota株,仅比Mukteswar株略低,而中等毒力Mukteswar株致病力高应用有局限性,而HBNU/LSRC/F3株可能具有更强的抗肿瘤应用价值。
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