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目的：①分析莽山烙铁头蛇(Zhaoermia mangshanensis)粗毒的生物学活性以及对粗毒中的蛋白质(或者多肽)进行鉴定和分析。②分离纯化具有生物活性的毒素分子。实验方法：①膜片钳全细胞记录模式下检测莽山烙铁头蛇粗毒对大鼠背根神经节(DRG)细胞上电压门控钠、钾、钙离子通道的影响。②利用分子筛、反相高效液相色谱(RP-HPLC) MALDI-TOF质谱技术分离纯化粗毒并分析蛇粗毒中的分子量信息(主要分析分子量<10000Da的多肽组分)。③利用超滤、双向凝胶电泳(2-DE)、蛋白质点的胶内酶解、两种质谱技术(TOF-Q和HCT)以及通过生物信息学处理,鉴定并分析蛇粗毒中的蛋白质信息。测定粗毒的三种酶活力(乙酰胆碱酯酶、酪蛋白水解酶、碱性磷酸酶)。结果：①膜片钳实验表明莽山烙铁头蛇粗毒对大鼠背根神经节细胞上河豚毒素不敏感型(TTX-R)钠电流有抑制作用,且具有浓度依从性,IC50大于1000mg/L, 1000mg/L粗毒可抑制TTX-R型钠电流49.4%。粗毒对大鼠背根神经节细胞上河豚毒素敏感型(TTX-S)钠通道、钾通道和钙通道几乎无作用。②莽山烙铁头蛇粗毒多肽部分的分子量集中在1000Da-5000Da之间,且在分离纯化毒素时乙腈浓度升至20%时开始有毒素组分被洗脱出来,其中分子量为924Da,1232Da, 1814Da,3081Da,4082Da的毒素分子在粗毒中含量较高。③经蛋白质组分析,从莽山烙铁头蛇粗毒共鉴定到153种蛋白质,分子量范围在3474Da到243,128Da之间,处于10kDa-30kDa之间的蛋白质居多；等电点分布在4.61-10.46之间,主要集中在5-7和8-10之间；疏水值在-0.883-+0.052之间,90%以上蛋白质的疏水值为负；鉴定到的大部分蛋白是与催化作用有关的蛋白,测定的粗毒三种酶活中蛋白水解酶活力较高(76.40U/mg),乙酰胆碱酯酶活力为46.45U/g,碱性磷酸酶活力为3.1836U／g。有9种蛋白质可能发生了磷酸化修饰,其中有7种与催化作用相关,磷酸化位点需进一步验证。结论：莽山烙铁头蛇粗毒抑制TTX-R型钠通道,且这种抑制作用呈浓度依赖性,这对于进一步筛选具有镇痛等活性成分的分子具有重要的生物学意义。本研究将莽山烙铁头蛇粗毒中多肽及蛋白质信息做了较为详尽的鉴定和分析,对完善并尽快建立稀有蛇种莽山烙铁头蛇蛋白质资源数据库具有极为重要的生物学意义。