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蛭弧菌类群(Bdellovibrio and like organisms)是一类革兰氏阴性菌,具有寄生、进而裂解其它菌的作用,是自然环境中病原菌滋生的天然生物控制因子,誉有“活性抗生素”的美称。目前对蛭弧菌类群裂解消除潜在致病菌包括各种致病性弧菌方面已有较广泛的研究,在水产养殖领域,蛭弧菌作为一种净化水质、控制水体病原菌的新型微生态制剂被广泛使用。为了更好的将蛭弧菌作为可在水产养殖病害防治上广泛应用的有益菌,本文从海泥中分离纯化出两株咸水蛭弧菌菌株,分别命名为BDHSH06和BDH12,随后对其生物学特性作了研究,并且将蛭弧菌菌株BDHSH06分别应用于斑节对虾、九孔鲍、皱纹盘鲍及大菱鲆等水产品的养殖中,研究同一株蛭弧菌对不同水产动物,不同养殖体系中环境和动物肠道细菌总数和弧菌的影响,蛭弧菌在养殖系统中的归趋变化以及对养殖体系中微生物群落的影响,以期建立蛭弧菌在水产养殖应用中的理论依据,推动蛭弧菌在水产养殖业中的产业化应用。1、采用双层平板法,分别以腐败希瓦氏菌菌株12和副溶血弧菌菌株SH06为宿主,从海泥中分离纯化出两株可以产生典型噬菌斑的菌株,分别命名为BDH12和BDHSH06。结合透射电子显微镜和16S r DNA片段序列分析证实其为两株蛭弧菌,与已知的Bacteriovorax,Vampirovibrio,Bdellovibrio和Peredibacter属关系并不密切。裂解谱显示BDH12和BDHSH06分别可以裂解57株宿主中的47株(82.5%)和48株(84.2%),两株蛭弧菌共可以裂解其中98.2%(57株宿主菌中的56株)的宿主菌,宿主菌中的副溶血弧菌、霍乱弧菌和溶藻弧菌都可被两株蛭弧菌裂解。生物学特性证实两株菌生长的最佳p H、盐度和温度分别为7.2,3%和30°C,它们不能利用高温灭活的宿主。2、85天的斑节对虾养殖试验结果证实,蛭弧菌组的对虾成活率,体长和体重分别为48.1±1.2%,99.8±10.0 mm和6.36±1.50 g,对照组分别为31.0±2.1%,86.0±11.1 mm和4.21±1.56 g,蛭弧菌可以显著提高(P<0.05)对虾成活率和生长效率。随着蛭弧菌BDHSH06的加入,斑节对虾养殖水体和肠道的细菌总数和弧菌显著下降(P<0.05)了1.3-4.5 log cfu·ml-1/cfu·g-1。试验期间,蛭弧菌在水体中的含量在0-24 pfu·ml-1之间,对虾肠道中没有检测出蛭弧菌。采用PCR-DGGE分子生物学方法研究蛭弧菌BDHSH06对养殖水体细菌群落的影响,结果显示,在试验期间蛭弧菌组有44%的细菌群落消失,其中57.1%为不可培养细菌。3、采用添加蛭弧菌制剂并结合周期换水的方式研究蛭弧菌BDHSH06对九孔鲍养殖水体和肠道细菌总数,弧菌以及养殖水体中微生物群落的影响。结果表明,蛭弧菌组养殖水体细菌总数和弧菌分别从对照组的4.28±0.12 log cfu·ml-1和2.55±0.16 log cfu·ml-1减少到3.56±0.16 log cfu·ml-1和1.90±0.15 log cfu·ml-1。鲍肠道细菌总数和弧菌分别从7.22±0.13 log cfu·g-1和5.33±0.22 log cfu·g-1减少到5.96±0.02 log cfu·g-1和4.21±0.21log cfu·g-1。试验期间,蛭弧菌在水体中的含量范围在1.78-228.89 pfu·ml-1之间,九孔鲍肠道中没有检测出蛭弧菌。养殖水体不同时期微生物群落的PCR-DGGE图谱显示,对照组和蛭弧菌组细菌丰度值、香农指数和Pielou均匀度指数范围分别为0.54-0.97,1.38-2.82,0.35-0.61和0.50-0.75,1.30-2.31,0.34-0.56。分析各菌群相对浓度表明,当水体菌群数(条带数)较少时(<21条),蛭弧菌BDHSH06可以减少水体优势菌群浓度,同时促进非优势菌群的生长,而当水体菌群数迅速增长时(>21条),蛭弧菌不仅可以显著减少菌群数,还可以减少各菌群的相对浓度。4、与对照组相比,蛭弧菌添加4小时后可以显著减少皱纹盘鲍水体(P<0.05)4.4%-23.6%的细菌总数,换水前的水体细菌总数虽略有下降,但与对照组相比差异并不显著;蛭弧菌组水体弧菌无论是换水前还是加菌后4小时均比对照组显著下降,减少范围在2.6%-44.7%之间;蛭弧菌可以显著减少藻中的弧菌含量,但对细菌总数浓度影响不大;蛭弧菌组皱纹盘鲍肠道细菌总数显著(P<0.05)减少2.2%-35.1%;肠道弧菌显著减少5.0%-39.1%。试验期间,蛭弧菌在水体中的含量在1.85±0.05-2.57±0.02 log pfu·ml-1之间,鲍肠道和藻中均没有检测出蛭弧菌。对照组和蛭弧菌组细菌丰度值,香农指数和Pielou均匀度指数范围分别为0.60-0.80,2.40-2.67,0.57-0.64和0.48-0.80,2.23-2.68,0.54-0.67。试验期间,蛭弧菌可以减少皱纹盘鲍水体菌群相对浓度。5、添加蛭弧菌BDHSH06对大菱鲆养殖水体的细菌条带数,细菌丰度值,香农指数和Pielou均匀度指数影响均不大。对照组细菌丰度值在0.64-0.88之间,平均为0.76,香农指数在2.34-2.96之间,平均为2.56,Pielou均匀度指数在0.58-0.66之间,平均为0.61;蛭弧菌组细菌丰度值在0.56-0.92之间,平均为0.72,香农指数在2.23-2.86之间,平均为2.54,均匀度指数在0.56-0.66之间,平均值为0.61。蛭弧菌不能减少大菱鲆水体菌群的相对浓度。蛭弧菌BDHSH06可以显著减少斑节对虾,九孔鲍和皱纹盘鲍水体和肠道细菌总数和弧菌,在预防水产动物细菌性疾病,尤其是弧菌病方面有显著作用;在水体中的含量在2.6 log pfu·ml-1以内;可以改善水体微生物菌群结构,是一株应用前景广阔的水产用海洋性蛭弧菌菌株。BDHSH06在水体p H 6.8-7.2,盐度30‰,水温在25-30°C,水体细菌总数和弧菌浓度分别高于104 cfu·ml-1和103 cfu·ml-1,肠道细菌总数和弧菌分别高于104 cfu·g-1和103 cfu·g-1时应用效果更好。