纤维素酶是一组复合酶的统称，主要包括内切葡聚糖酶，外切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶，这三种酶协同作用将纤维素转化成葡萄糖。近年来随着纤维素酶在棉织品水洗整理工艺及洗涤剂工业中的成功应用，细菌纤维素酶制剂已显示出良好的使用性能和巨大的经济价值。然而，纤维素酶的大规模工业化应用在很大程度上受纤维素酶酶活较低以及成本较高的限制。通过基因工程手段，提高纤维素酶的活性是降低纤维素酶成本的一个有效途径。 本研究以枯草芽孢杆菌C-36内切葡聚糖酶基因为目的基因(GenBank AccessionNo.DQ782954)，从信号肽切割位点序列之后设计上游引物(引入一个Bgl II酶切位点)，在终止密码子处设计下游引物(引入一个Sph I酶切位点)，通过PCR去除该基因信号肽编码序列，PCR扩增得到大小约1.5Kb的单一条带产物，即为目的基因片段。该产物经酶切处理后连接到巨大芽孢杆菌表达载体pHISl525中，并转化巨大芽孢杆菌WH320原生质体，使之在表达载体自身信号肽的引导下进行融合表达。刚果红染色表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达，且产物具有内切葡聚糖酶活性。SDS-PAGE分析表明该酶相对分子量约为55KDa。 对基因工程菌pHBM-End培养条件优化结果表明：250mL三角瓶中装入50mL LB培养基(含有10μg/mL Tet)，按5％的接种量接种种龄为12h的液体种子，培养4h后加入终浓度为0.2％的木糖进行诱导，9h后上清液中酶活可达889U/mL,是出发菌株C-36(79.2U/mL)的11.22倍。酶学性质研究表明，基因工程菌所产内切葡聚糖酶的最适反应pH值和温度分别为pH6.0、65℃，该酶在40℃～75℃之间相对稳定，可保持在最高酶活的70％以上，在pH4.5～pH10.0之间相对稳定，可保持在最高酶活的80％以上。