背景：PCR技术(Polymerase Chain Reaction)足1985年由美国Cetus公司人类遗传研究室的伟大科学家K．B．Mullis博士于1985年发明的，它是一种能够在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为“基因的体外扩增法”。它的出现，从生物学研究到临床应用，从考古学到法医学，在众多领域引发了翻天覆地的、革命性的变化。目前，PCR技术已经延伸、发展了数十种新的类型，如RT-PCR、RealTime PCR、Nested PCR等，它们各自应用于不同的方面和领域。常规PCR技术尽管应用非常广泛，但是它通常难以扩增长度大于5 Kb的目的序列，这就限制了常规PCR技术更为广泛的应用。Long Range PCR技术就是为克服这一问题而发明的，并已开始被应用于一些研究方面。但是，作为一项全新技术，Long Range PCR应用中的具体最优反应条件及参数仍在探索和改进之中。 目的：我们的目的区域是20号染色体上大约．5Mb的DNA片段，就此研究摸索Long Range PCR技术应用中的最优条件。 方法：在目的染色体节段上，从GeneBank数据库选择35个目标基因，对目的DNA片段进行引物设计，再进行Long Range PCR．反应。PCR产物用琼脂糖凝胶电泳进行检测。为了获得最优化的反应扩增条件，我们系统的研究了Long Range PCR的各种实验参数，如模板的质量和浓度、Mg2+浓度、反应循环等。 结果：实验结果显示，对于大多数基因组区域而言，Long Range PCR．反应的最优参数是：预变性94℃ 1min；变性94℃30s；退火．延伸步骤合并，最佳反应温度大约是68℃；退火-延伸时问大约是1Kb/min，重复30个循环；最后72℃延伸10min。 最适反应体系为：总反应体积50μl，浓度为25mM的Mg2+5μl、10xbuffer 5μl、10mM dNTPs 8μl、6.4μM上下游引物各2.5 μl、5U/μl LA-Taq DNA聚合酶0.5μl、DNA模板1.0-1.5μl；GC碱基富集区域，用特殊的GC缓冲液有利于扩增反应，最适反应体系为：总反应体积50μl，2xGC Buffer(含Mg2+)25μl、10mM dNTPs 8μl、6.4μM上下游引物各2.5μl、5U/μl LA-Taq DNA聚合酶0.5μl、DNA模板1.0-1.5μl。从实验中摸索出来的结论是，模版的质量(完整性)和浓度是扩增反应成功的最重要因素。结论：Long Range PCR每次反应能够成功扩增15Kb左右长度的基因组区域，我们已经摸索出了最优化的反应条件，并且总结出模版DNA是成功扩增的最重要因素。