紫楠有效成分分离纯化鉴定及其生物活性研究

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紫楠是樟科楠属植物,紫楠是极其珍贵的用材树种,供建筑、贵重家具和细工用,是我国南方普遍可见的重要经济作用林,在森林、园林、木材、香料等方面都占有重要的地位。紫楠在国内主要散布在长江流域及华南地区,在我国民间也可以作为草药应用,具备比较好的活性功能,如治疗腹泻、镇痛、抗炎抑菌等。第一部分论述了常见天然产物活性成分提取、分离、纯化方法及具有突破性的研究结果,同时对楠木类植物成分分析及生物活性研究进行了系统而细致的总结。楠木植物中重点含有木酯素类、丁内酯类、皂苷类等化学成分,其重要的生理功能有肝脏保护功能、神经保护作用、抑制肿瘤细胞增值活性、Caspase-3酶增强作用等。最后,就整个紫楠有效成分分析及活性研究的思路和内容进行了概括,研究内容分为紫楠有效成分的高效提取、紫楠各个极性部位的生物活性筛选、紫楠成分初步分析、紫楠有效成分分离纯化及鉴定。第二部分在溶剂浸提的前提下,使用用单因素控制方法,使用响应面分析方法优化紫楠乙醇浸提物的浸提条件并明确其最适宜的提取方案。分别控制浸提乙醇浓度、浸提时间、浸提温度,采用单因素控制实验以及响应面方法分析,三者对提取的影响作用都是极显著的,同时提取时间则影响最大,乙醇浓度次之。综合分析显示紫楠醇提物最佳提取条件是:乙醇浓度95%、时间6h、温度90℃、料液比1:8,紫楠醇提物在最适条件下提取率为6.6%。第三部分实验对紫楠的乙醇浸提物及其紫楠石油醚、紫楠乙酸乙酯、紫楠正丁醇三个极性部分的生物活性进行了实验研究,其中分别对包含紫楠乙醇浸提物在内的四个极性部位进行了抗氧化、微生物生长抑制、抑制肿瘤细胞增殖等一系列活性实验。研究结果显示,紫楠乙醇浸提物和紫楠乙酸乙酯萃取相体外抗氧化作用较强;而紫楠石油醚萃取相对微生物生长的抑制,尤其是抑制食源性微生物大肠杆菌效果明显。在抑制肿瘤细胞增值方面,以SPCA-1、MCF-7、HepG2为研究对象,较之于阳性对照5-氟尿嘧啶发现,紫楠各极性提取物对肿瘤细胞生长抑制效果并不明显,但紫楠四个成分相比较而言,紫楠乙酸乙酯萃取相对受试的三类肿瘤细胞都存在广谱的增值抑制能力。而紫楠石油醚相几乎没有细胞毒活性,紫楠正丁醇萃取相则对人乳腺癌MCF-7细胞表现出选择性细胞毒活性。经过对紫楠各极性部分的初步活性筛选,紫楠活性成分可能多集中在自紫楠乙酸乙酯萃取部位,因此在文章第五部分,实验选择对紫楠乙酸乙酯萃取相展开分离纯化并对制备获得的化学成分进行结构鉴定分析。第四部分通过液相-串联质谱、气相-串联质谱技术分别对紫楠根茎乙醇提取物和紫楠叶挥发成分进行初步的分析研究。实验结果显示,紫楠木材醇提物初步分析,参考相关数据库分离得到了12个化合物,它们分别是Tetramethyl-o-scutellarin、乌头酸、表-儿茶素、儿茶素、鞭毛巨苔酸、Miconioside A、亚油酸、十八碳三烯酸、柚皮素、润楠丁内酯D、异阿魏酸、Myristyl-acetate。而气相-串联质谱鉴定紫楠叶挥发成分共分析获得了19个化合物,主要包括α-蒎烯、石竹烯等烯醇类化学成分。第五部分采用薄层层析及各种柱色谱(硅胶柱色谱、凝胶柱色谱)等手段,结合现代分离纯化方法半制备液相及高效液相分析,共制备得到4个化合物。在此基础上,实验通过质谱分析、核磁共振谱分析等波谱学技术(1H-NMR,13C-NMR,135DEPT-NMR)鉴别紫楠乙酸乙酯相四个化学成分的结构,分析结果显示:化合物1:齐墩果酸;化合物2:阿魏酸;化合物3:丁香树脂酚;化合物4:儿茶素。
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