动物多肽毒素有很多优良的性质,其作用范围广泛,对血液系统、神经系统、免疫系统以及细菌真菌均有不同的作用,是开发新型药物和新型杀虫剂抗生素的重要资源库。其中,富含二硫键的多肽毒素多样性丰富,可以特异性地作用并调节电压门控离子通道,从而阻断或抑制细胞电信号的传导,因而有着极其重要的研究价值。针对动物毒素的异源表达和纯化,本文开展了以下两个工作,为深入研究有毒动物毒素的结构功能以及研发新型多肽类药物奠定了基础。1、蜈蚣毒素κ-SLPTX-Ssm1b的表达纯化及活性研究。κ-SLPTX-Ssm1b是蜈蚣S colopendra subspinipes mutilans完整转录产物所构建的cDNA文库中与电压敏感钾离子通道抑制剂κ-SLPTX-Ssm1a同源的多肽。且两者含三对位置相同的二硫键,因此可能存在类似的空间结构和相似的生理活性。本实验利用pET-43-His-SUMO原核表达载体,通过E.coli SHuffle^TM菌种自动诱导表达重组蛋白,随后利用镍柱和RP-HPLC纯化以及Ulp1激酶酶切获得目的蛋白,最终通过MALDI-TOF质谱鉴定其分子量为5532.1870 Da,与理论值相符。本实验中该毒素多肽产量为1 mg/L,电生理活性显示其对大鼠rKv1.3和rKv1.7均无明显作用。2、蚂蚁毒素U1-PONTX-Ae1d/e/g的表达纯化。通过对蚂蚁Anochetus毒液粗毒的分离,确定了另外4种与钙通道活性毒素U1-PONTX-Ae1a毒素序列同源性很高的毒素序列（U1-PONTX-Ae1d/e/f/g）。它们含有与U1-PONTX-Ae1a相同位置的两对二硫键,因此可能有相似的活性。在本实验中,利用异源表达的方式获取U1-PONTX-Ae1d/e/f/g毒素。成功分离纯化得到U1-PONTX-Ae1d/e/g三条毒素,其产量均为0.3 mg/L左右,为进一步的活性检测和药物筛选奠定了基础。