在分子生物学领域,腺病毒载体是将外源基因导入动物细胞内经常使用的载体之一。由于其靶细胞种类多,对增殖期及静止期细胞均有很高的转导效率,易于分离纯化,可容纳较大的目的基因片段,理化性质较稳定,不整合到宿主基因组中,不会引起插入突变,因而被广泛用于基因治疗、体外基因转染及基因疫苗制备等实验及临床研究中。在现代生物学研究中,主要通过体外免疫法制备单克隆抗体,其较体内免疫法有明显的优势。单抗导向疗法虽在临床中取得了一定治疗效果,但其存在的问题也限制了其临床应用和疗效提高。近年来,关于体外免疫,抗原呈递、T细胞受体、B细胞活化、细胞因子等方面的研究都取得了一定进展。本论文主要通过研究腺病毒介导的体外免疫方法,采用腺病毒介导树突状细胞抗原呈递,再经多肽刺激后,利用流式绌胞术,通过检测T淋巴细胞IFN-γ的分泌,进而研究加入HDAC抑制剂对腺病毒载体介导的体外抗原呈递的影响。　　 目的:　　 探讨腺病毒介导的体外免疫方法,通过腺病毒介导树突状细胞抗原呈递,利用流式细胞术,通过检测T淋巴细胞IFN-γ的分泌,研究HDAC抑制剂对腺病毒载体介导的体外抗原呈递的影响。　　 方法：　　 1.腺病毒介导的树突状细胞抗原呈递通过建立小鼠骨髓源树突状细胞体外培养方法,在此基础上用携带绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的腺病毒转导树突状细胞(DC),通过荧光倒置显微镜观察荧光表达,并经流式细胞仪检测GFP平均荧光强度表达以检测腺病毒转导效率。穿刺法制备小鼠脾单细胞悬液,腺病毒转导树突状细胞与脾细胞以1:10比例进行混合细胞培养三天后,经多肽(HYLSTQSAL)刺激通过流式细胞仪检测T淋巴细胞IFN-γ的分泌。　　 2.HDAC抑制剂作用于腺病毒载体介导的体外抗原呈递通过加入HDAC抑制剂(TSA)作用于腺病毒载体转导树突状细胞,经荧光倒置显微镜观察荧光强度表达改变,并通过流式细胞仪检测GFP荧光强度表达的改变。穿刺法制备小鼠脾单细胞悬液,TSA(±)腺病毒转导树突状细胞与脾细胞以1:10比例进行混合细胞培养三天后,经多肽(HYLSTQSAL)刺激通过流式细胞仪检测TSA(±)两组细胞T淋巴细胞IFN-γ的分泌的改变。　　 结果：　　 1.经多肽(HYLSTQSAL)刺激后流式细胞仪可检测到T淋巴细胞IFN-γ的分泌。　　 2.加入HDAC抑制剂(TSA)作用后,树突状细胞表达的GFP荧光强度明显增强,经多肽(HYLSTQSAL)刺激后通过流式细胞仪检测TSA(±)两组细胞T淋巴细胞IFN-γ的分泌没有显著性差异。　　 结论：　　 本实验成功建立腺病毒介导的树突状细胞(DC)抗原呈递的体外免疫方法,HDAC抑制剂(TSA)能增强腺病毒介导的GFP基因在树突状细胞的表达,HDAC抑制剂(TSA)对腺病毒载体介导的体外抗原呈递没有显著性影响。