目的：　　观察并评价经抗菌肽 GL13K修饰后的纯钛表面对巨噬细胞 RAW264.7生存、形貌、炎性分泌功能及极化状态等的影响。　　方法：　　1.钛表面抗菌肽 GL13K修饰及理化性能检测：采用硅烷化的方法将 GL13K共价修饰到纯钛片表面，分别利用 X射线光电子能谱仪、原子力显微镜、接触角检测仪检测钛片经抗菌肽 GL13K修饰前后元素含量、粗糙度和接触角的变化情况。　　2.抗菌肽 GL13K修饰的钛表面对巨噬细胞的影响：根据钛片是否进行抗菌肽GL13K修饰及修饰浓度，设置以下3个组：纯钛片组（对照组）、0.1 mmol/L GL13K修饰组、0.4 mmol/L GL13K修饰组。将巨噬细胞RAW264.7分别接种于3组钛片，在高糖 DMEM培养体系进行培养。培养结束后，取钛片表面巨噬细胞和培养液完成相关指标检测：　　2.1巨噬细胞生存评价：（1）分别在培养的第2 h、4 h、6 h、8 h、10 h、12 h时取出钛片，对不同钛表面的巨噬细胞进行固定、DAPI染色，荧光显微镜下观察巨噬细胞黏附情况并进行细胞核计数；（2）分别在培养的第12 h、24 h、48 h、72 h时取出钛片转移至新24孔板，加入CCK-8试剂后继续培养2 h。培养结束后，用酶标仪检测细胞反应液的吸光度值，测定巨噬细胞的增殖-毒性情况；（3）巨噬细胞在含与不含500 ng/ml LPS的培养液中培养，在培养的第48 h时取出钛片，对不同钛表面的巨噬细胞进行细胞凋亡检测。　　2.2巨噬细胞抗炎性评价：（1）巨噬细胞在含与不含500 ng/ml LPS的培养液中培养，分别在培养的第12 h、24 h、48 h时取出钛片，对不同钛表面的巨噬细胞进行固定后，用场发射扫描电镜观察钛片表面巨噬细胞形貌；（2）巨噬细胞在含500 ng/ml LPS培养液中培养，分别在培养的第6 h、12 h、24 h时收集钛片表面细胞，用 RT-PCR方法检测细胞因子 IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ、iNOS和Arg基因mRNA表达水平；（3）巨噬细胞在含500 ng/ml LPS培养液中培养，分别在培养的第12 h、24 h、48 h时取细胞培养上清液，用ELISA方法检测细胞因子 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α蛋白表达水平；（4）巨噬细胞在含500 ng/ml LPS培养液中培养，在培养的第72 h时收集不同钛片表面的细胞，应用流式细胞术检测巨噬细胞膜表面M1/M2极化标志分子的表达。　　结果：　　1.理化性能：　　（1）表面元素检测：钛表面经硅烷化修饰抗菌肽 GL13K后，X射线光电子能谱仪（XPS）的分析结果显示，其表面 C、N元素含量明显增加，修饰前后材料表面元素含量构成比差异具有统计学意义（?2=24.169，P＜0.001）。　　（2）粗糙度：原子力显微镜（AFM）镜下轮廓图显示，修饰后的钛表面出现明显的半球形突起，分布均匀，钛表面粗糙度 Sa为(34.95±1.42) nm，与修饰前的(15.74±0.71) nm比较，差异具有统计学意义（t=8.46，P＜0.001）。　　（3）接触角：接触角测量仪检测结果显示，经过 GL13K修饰的钛表面表现出疏水性的性能，修饰后的纯钛表面的接触角为（82.23±4.46）°，与修饰前接触角（66.01±3.76）°比较，差异具有统计学意义（t=28.37，P＜0.001）。　　2.巨噬细胞生存评价：　　（1）巨噬细胞早期黏附：荧光显微镜镜下可见黏附在钛片表面的巨噬细胞的细胞核核形完整，染色质均匀分布。对培养2h、4h、6h、8h、10h、12h后的细胞进行计数，结果显示，在培养2 h、4 h时，0.1 mmol/L与0.4 mmol/L GL13K组钛表面细胞黏附数量多于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），而当培养6 h、8 h、10 h和12 h，3组钛表面黏附的细胞数量接近，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。　　（2）巨噬细胞增殖-毒性反应：分别对培养12 h、24 h、48 h、72 h的巨噬细胞CCK-8检测结果显示，与对照组比较，各个时间点0.1 mmol/L GL13K组和0.4 mmol/L GL13K组的细胞计数接近，差异不具有统计学意义（P＞0.05）。　　（3）巨噬细胞凋亡检测：在培养的第48 h时，不同钛表面的巨噬细胞生存/凋亡差异不具有统计学意义（P＞0.05）。　　3、巨噬细胞抗炎性评价：　　（1）巨噬细胞形貌：场发射扫描电镜（SEM）镜下可见，LPS(-)组巨噬细胞12 h、24 h、48 h时，3组钛片表面的巨噬细胞形态无明显差别，细胞主要呈球形，细胞膜未见明显突起。LPS(+)组巨噬细胞12 h、24 h时，三组钛片表面的巨噬细胞形态同 LPS(-)组，培养48 h时，对照组的巨噬细胞呈盘状铺展，细胞膜较多突起，0.1 mmol/L GL13K组部分巨噬细胞出现两极伸长，但仍呈球形，非盘状铺展，0.4 mmol/L GL13K组仅有少量细胞的细胞膜微丝增多。　　（2）细胞因子 mRNA表达：RT-PCR结果显示，在培养的第6 h、12 h、24 h时，0.1 mmol/L组和0.4 mmol/L组巨噬细胞分泌 IL-1β、IL-6、TNF-α、iNOS mRNA水平均显著降低，而 IL-10、Arg mRNA表达明显升高，与对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。　　（3）细胞因子分泌：ELISA结果显示，在培养12 h、24 h、48 h时，0.1 mmol/L组和0.4 mmol/L组巨噬细胞分泌IL-1β、IL-6、TNF-α细胞因子蛋白水平均降低，而IL-10升高，与对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。　　（4）巨噬细胞 M1/M2极化标志分子表达：流式细胞仪的检测结果显示，在培养的第72 h时，0.1 mmol/L GK13K组和0.4 mmol/L GK13K组抑制巨噬细胞膜表面 M1极化标志分子的表达，而促进 M2极化标志分子的表达，与对照组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。　　结论：　　1、采用硅烷化的方法可以成功的将抗菌肽GL13K修饰到钛表面。　　2、抗菌肽GL13K修饰的钛表面对巨噬细胞生物相容性良好。　　3、钛表面可通过抗菌肽 GL13K修饰影响巨噬细胞 RAW264.7功能，调节其炎性因子分泌和极化状态平衡。