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目的构建弓形虫Ⅰ型（RH株）、Ⅱ型（Me49株）、Ⅲ型（VEG株）ROP16过表达慢病毒载体,转染至人单核THP-1细胞并进行稳转细胞株筛选,验证其在THP-1细胞中的表达,进而研究不同ROP16蛋白对THP-1细胞增殖、凋亡以及炎症反应的影响及机制,并利用RNA-Seq技术进行转录组测序分析,探讨不同ROP16对THP-1细胞在转录水平作用的差异。方法1.将构建好的过表达ROP16(over Eep-ROP16Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ)和空载体（over Eep-NC）慢病毒,转染THP-1细胞并构建稳转细胞株,在倒置荧光显微镜下观察稳转细胞绿色荧光蛋白的表达,采用PCR与Western blot技术验证ROP16在THP-1细胞中的表达,ROP16蛋白在THP-1细胞中的表达定位通过免疫荧光技术检测。2.通过CCK-8实验与流式细胞术检测ROP16蛋白对THP-1细胞的增殖与凋亡。3.利用Real time PCR检测炎性相关因子与趋化因子m RNA水平的表达,Western blot检测相关蛋白与信号通路蛋白的表达水平。4.稳转细胞通过Trizol裂解后进行RNA-Seq分析。结果1.构建的过表达ROP16重组慢病毒转染至THP-1细胞并稳定筛选后在荧光显微镜下可观察到强绿色荧光,Real time PCR与Western blot结果显示ROP16 m RNA与蛋白均在THP-1细胞中成功表达,与对照组相比,差异具有显著性（P＜0.01）。免疫荧光试验证明ROP16蛋白主要聚集于THP-1细胞核内,少部分ROP16蛋白位于核周围的胞浆中。2.CCK-8试验结果显示ROP16表达于THP-1细胞后细胞增殖率显著降低（P＜0.01）,over Exp-ROP16Ⅱ组增殖率最低;流式细胞术结果显示过表达三组细胞凋亡率均增加（P＜0.01）,且以over Exp-ROP16Ⅱ组增高最显著。3.以THP-1正常细胞组为对照,Real Time PCR检测over Exp-ROP16Ⅰ,over Exp-ROP16Ⅱ,over Exp-ROP16Ⅲ转染组促炎因子IL-1β、IL-18、IL-8、TNF-αm RNA均高表达（均P＜0.05）,以over Exp-ROP16Ⅲ组升高最显著（P＜0.01）,而IL-12 m RNA均低表达（P＜0.05）,抗炎因子IL-10也均高表达（均P＜0.01）,以over Exp-ROP16Ⅰ组上调最明显;对趋化因子CCL2、CCL3、CCL17、CCL8的影响,over Exp-ROP16Ⅲ组上调（P＜0.05）,而over Exp-ROP16Ⅰ与over Exp-ROP16Ⅱ组均下调（P＜0.05）,对于趋化因子CCL7,过表达三组均上调（P＜0.05）,以over Exp-ROP16Ⅲ组升高最明显（P＜0.01）,对于趋化因子CCL5的调节,过表达三组也均上调（P＜0.01）,以over Exp-ROP16Ⅱ组升高最明显。4.Western blot方法检测rop16基因过表达稳转THP-1细胞株全蛋白,与空白组和空载体组相比,过表达三组p Tyr705-STAT3和p Tyr641-STAT6蛋白均高表达（均P＜0.01）,over Exp-ROP16Ⅲ组升高最明显,over Exp-ROP16Ⅰ,over Exp-ROP16Ⅱ,over Exp-ROP16Ⅲ过表达组与对照组相比total-STAT3与total-STAT6蛋白表达无差异（P＞0.05）;对炎性小体相关蛋白NLRP3和Caspase-1的调节过表达三组均上调（P＜0.01）。5.转录组测序结果表明过表达组与对照组相比有显著的差异表达基因（P＜0.05）,过表达组间比较也有差异表达上调或下调的基因（P＜0.05）,差异基因KEGG富集分析显示,与空白组相比,over Exp-ROP16Ⅰ组的差异基因主要富集在免疫系统、传染病信号通路,主要差异基因有炎症反应相关因子C1QA、C1QC、S100A8、S100A9,over Exp-ROP16Ⅱ组与over Exp-ROP16Ⅲ组的差异基因主要富集在免疫系统IL-17信号通路,主要差异基因有炎症反应趋化因子S100A8与S100A9;对过表达组间差异显著的基因进行关键驱动基因（KDA）的筛选,得出8个关键驱动基因,分别为炎症反应相关因子CD163、S100A8、S100A9、C1QA、C1QB、C1QC、STAB1和GPR34;差异基因KEGG网络互作分析表明差异基因主要在代谢通路、趋化因子信号通路、细胞粘附分子、Toll样受体信号通路、细胞因子受体和溶酶体与细胞凋亡通路上表达。结论1.弓形虫Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型ROP16可通过过表达慢病毒载体转染至THP-1细胞内并表达ROP16蛋白,且ROP16蛋白在THP-1细胞中主要定位于细胞核内,少部分ROP16蛋白位于核周围的胞浆中。2.弓形虫ROP16蛋白抑制THP-1细胞增殖并促进其凋亡,Ⅱ型ROP16抑制细胞增殖和促进细胞凋亡效果最明显;ROP16表达于THP-1细胞后在免疫系统、趋化因子信号通路、细胞因子受体以及细胞生长与凋亡等通路上有差异表达基因,且3型之间差异显著。3.弓形虫ROP16对THP-1细胞免疫调节机制可能通过激活NLRP3炎性小体诱导促炎性因子产生,并磷酸化STAT3和STAT6调控抗炎作用。