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柑桔碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus,CTLV)引起的柑桔碎叶病是一种重要的柑桔病害,该病最早于1962年在隐症的北京柠檬上被发现。CTLV属于发形病毒属(Capillovirus),基因组为正义单链RNA。该病毒可由嫁接和机械感染传播,主要为害用枳及其杂种作砧木的柑桔树引起嫁接口不亲和、植株矮化和叶片黄化。CTLV在我国分布广泛,在浙江、湖南、福建和广西等省的局部地区已造成比较严重的为害。传统指示植物检测方法是鉴定CTLV的重要手段,但其存在鉴定周期长,季节性强,需温网室设施等缺点。因此有必要建立快速、稳定的检测技术,并研究寄主对CTLV遗传多态性的影响,为科学防控该病提供技术保障和理论依据。本研究通过多对引物的比较,建立了CTLV的常规反转录多聚酶链式反应(reversetranscription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测体系和CTLV的实时荧光RT-PCR检测体系。通过限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP),单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)技术以及序列分析对分别接种于8种柑桔类植物上的CTLV分离株HH和XLB所获得的16个亚分离株和2个毒源的外壳蛋白基因(CP)的多态性和序列变异进行了分析。主要结论如下:1.应用引物CTL5607和ASCT-3’,建立了CTLV的常规RT-PCR检测方法,扩增的目的条带大小为889 bp。2.国内首次建立了使用SYBR GreenⅠ染料法检测CTLV的实时荧光RT-PCR体系,该检测体系的特异性强(对衰退病毒、温州蜜柑萎缩病毒和鳞皮病毒无特异性扩增),灵敏度高(比常规RT-PCR灵敏100倍),适用性广(可检测出多种柑桔类植物中的CTLV),并具有污染几率小、快速、操作和试验设计简单等优点。3.混合侵染的CTLV分离株HH接种于8种寄主后,其CP/HinfⅠ酶切图谱没有发生的变化;但是其CP/SSCP谱带发生了变化,接种到锦橙、红桔和代代酸橙中的亚分离株其CP/SSCP谱带与毒源HH的一致都为3条,而接种到柠檬和腊斯克枳橙中的亚分离株其CP/SSCP谱带为2条,接种到椪柑、山小桔和香橙中的亚分离株其CP/SSCP谱带为4条。对HH和其8个亚分离株CP的序列分析发现其核苷酸同源性高达99.3%-100%。4.株系构成单一的CTLV分离株XLB接种于8种寄主后,其CP/HinfⅠ酶切图谱没有发生明显的变化,其CP/SSCP谱带均为2条。对XLB和其8个亚分离株CP的序列分析发现其核苷酸同源性为96.5%-99.8%。