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钙依赖蛋白激酶(CDPKs)是一种钙依赖的Ser/Thr型蛋白激酶,在植物生长发育和逆境信号传递中起重要作用;平邑甜茶(Malus hupehensis (Pamp) Rehd. var pinyiensis Jiang, PYTC)是优良的苹果砧木。本文从平邑甜茶叶片中克隆了MhCDPK全长,分析了其序列与编码蛋白,研究了胁迫下MhCDPK表达,并成功地建立了平邑甜茶再生体系,主要结果如下:1.根据已知植物CDPK基因序列设计引物,利用RT-PCR获得了平邑甜茶CDPK基因,命名为MhCDPK。GenBank注册号为EF519915。序列分析表明,MhCDPK cDNA全长1999bp,编码区长1701bp,编码566个氨基酸,分子量和等电点分别为62.9kD和5.26。MhCDPK编码的蛋白具有典型的CDPK结构特征,包括N端可变区(1-108)、激酶区(109-366)、连接区(367-402)和调节区(403-566)。推测的MhCDPK氨基酸序列与植物中的许多CDPKs具有很高的同源性。2.实时荧光定量PCR表明,NaCl、干旱以及重金属等胁迫均能提高MhCDPK基因表达量。3.构建了MhCDPK正义与反义表达载体并转化农杆菌LB4404,对烟草叶片进行侵染,获得了转反义基因烟草植株。构建了pBI121-gMhCDPK -GFP表达载体并转化农杆菌EHA105,侵染洋葱表皮使其表达,在荧光显微镜下观察,MhCDPK定位于细胞质内。4.幼苗茎段为离体培养合适的外植体;在培养基MS+0.5mg·L-1BA +0.2mg·L-1ZT+0.1mg·L-1NAA中增殖倍数达15.6倍;培养基1/2MS+IBA0.5 mg·L-1+NAA0.3 mg·L-1中生根率达85.6%,生根条数达15.5条。5. 6-BA、ZT、NAA和暗培养均有利于叶片不定芽的分化;以MS+ 6.0mg·L-1 BA+0.5mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1ZT + 6.0 mg·L-1 SNP为培养基,暗培养15d,叶片不定芽分化效果最好,再生率达67.8%。6. SNP对平邑甜茶继代增殖以及不定芽和根系分化影响显著,并呈明显剂量效应。SNP对第1代继代组培苗的增殖倍数影响最大,20μmol·L-1 SNP增殖倍数最高达11.26倍;20~ 30μmol·L-1 SNP能显著地增强子叶与继代组培苗叶片不定芽的再生能力;75μmol·L-1 SNP对组培苗生根效果最好。