本研究分为三章： 第一章、SCD1 与高脂饮食诱导大鼠肝细胞凋亡的相关性 目的:研究SCD1 在高脂饮食大鼠肝脏的表达及其与肝细胞凋亡的相关性。 方法:30 只SD 大鼠随机分成正常组、高脂组，分别给予普通饲料和高脂饲料喂养。在实验的第8w，16w和24w 分批处死。HE 染色观察肝细胞组织学改变，逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测SCD1 mRNA和SPT mRNA的表达，TUNEL 方法观察肝细胞的凋亡。 结果:肝组织HE 染色显示高脂组大鼠肝脏8w 即达到脂肪肝的诊断标准。RT-PCR 分析结果显示高脂组SCD1 mRNA 表达下降，SPT mRNA 表达进行性上升。TUNEL 凋亡检测表明，随着高脂喂养时间延长，肝细胞凋亡加重。SCD1 表达与SPT和凋亡指数（AI）呈负相关，SPT 表达和AI 指数呈正相关。 结论:长期高脂饮食可引起肝SCD1 表达下调，同时，促进细胞凋亡关键基因SPT的表达，肝细胞凋亡增多。 第二章、SCD1 重组慢病毒载体构建 目的:构建含有大鼠肝脏SCD1基因的重组慢病毒载体pGC-FU-SCD1-GFP，为进一步研究SCD1基因在大鼠肝细胞凋亡中的作用奠定基础。 方法:TRIZOL 法抽提大鼠肝脏总RNA，RT 得到cDNA。根据Gene-Bank中已经公布的SCD1基因序列，设计SCD1 钩取引物，PCR 扩增SCD1 目的基因。SCD1基因克隆到慢病毒载体pGCFU质粒中。重组质粒经Age1 酶切、PCR、及测序鉴定后，脂质体介导转染293T细胞，荧光显微镜观察GFP的表达及Western Blotting 检测SCD1蛋白的表达。最后经293T细胞包装扩增后得到携带SCD1基因的重组慢病毒，转染293T细胞并对SCD1蛋白鉴定。 结果:PCR、酶切及测序鉴定证实目的基因正确克隆至慢病毒质粒pGC-FU中。293T细胞包装出病毒颗粒的滴度为2×109TU/ml。转染293T细胞后经荧光显微镜可观察到GFP的表达，Western Blotting 检测可见SCD1蛋白的表达。 结论:过表达SCD1 重组慢病毒载体成功构建。 第三章、SCD1 过表达影响大鼠BRL 肝细胞系凋亡机理 目的:探讨SCD1 过表达影响大鼠BRL 肝细胞系凋亡作用的可能途径。 方法:通过台盼兰染色检测软脂酸诱导BRL 肝细胞死亡率确定下游实验软脂酸添加浓度。预试验测定慢病毒载体在大鼠BRL 肝细胞系中表达的MOI 值。培养细胞分组为：非加药组和加药组。非加药组包括一般培养细胞组（CON）、一般培养加阴性病毒对照组（NC）及一般培养过表达病毒组（SCD1-LV）；加药组包括一般培养加软脂酸组（CON+）、一般培养加阴性病毒和软脂酸组（NC+）及一般培养加过表达病毒和软脂酸组（SCD1-LV+）。实时荧光定量PCR 检测SCD1 mRNA，逆转录聚合酶链反应法检测SPT mRNA 表达的变化，流式细胞术测细胞线粒体膜电位的变化，用膜电位正常细胞百分比（JC-1+％）表示膜电位改变，PI 单染检测各组细胞凋亡及周期分析。 结果:与对照组相比，400μmol/L的软脂酸诱导72h细胞死亡率显著上升。病毒在BRL 肝细胞的复感染指数(MOI)为20。SCD1-LV组SCD1 表达明显上升。软脂酸诱导引起CON+和NC+组SCD1 表达的下降、SCD1-LV+组SCD1表达明显上升；CON+和NC+组SPT 表达升高，SCD1-LV+组SPT的表达则有一定的下降；CON+和NC+组JC-1+％较低，SCD1-LV+组JC-1+％与对照组相似；CON+和NC+组出现明显的凋亡峰，且细胞周期中S期细胞比例显著下降，细胞增殖能力下降，SCD1-LV+组凋亡细胞比率显著减少。 结论:用SCD1 慢病毒载体感染BRL肝细胞系，SCD1 表达升高，增强细胞对饱和脂肪酸的去饱和作用，过表达SCD1 降低软脂酸诱导的脂毒性和凋亡，使紊乱的线粒体膜电位得到恢复。