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β-半乳糖苷酶可以利用乳糖合成低聚半乳糖(GOS)，用作功能性食品配料。β-半乳糖苷酶固定化是工业化处理乳清，使其乳糖合成GOS的必要步骤。本论文研究β-半乳糖苷酶的固定化方法，以期获得性能良好的固定化酶，将其用于处理乳清合成GOS。 将乳清粉用蒸馏水溶解复原成一定乳糖浓度的溶液作为实验样品。GOS得率使用TLC法检测，TLC法的准确性用HPLC法进行确证，证明TLC法是检测GOS的有效方法。 选择壳聚糖作载体，戊二醛交联的方法固定化β-半乳糖苷酶，研究了固定化的最适条件：确定出先固化后交联的顺序较好，4℃固定化6h，pH6.0，1％戊二醛室温交联30min，加酶量为0.4mg／g干重壳聚糖珠，活力回收率达到26.43％，该结果不理想。 实验制备了海藻酸钙-明胶凝胶包埋法固定化酶，其最优条件为：高粘度海藻酸钠2.54％，明胶0.88％，低粘度海藻酸钠0.24％时，凝胶获得最大的稳定性，重复使用次数可以达到8次。经过戊二醛交联防止酶泄漏，并且提高了固定化酶的操作稳定性，加酶量0.06％(w/v)，活力回收率最高可达80％，即固定化酶的比活力为15.1u/g凝胶。海藻酸钙凝胶包埋制备的固定化酶最适温度为55℃，较游离酶高5℃；最适pH升高0.5个单位，耐热性和pH耐受性变宽，而且具有向碱偏移的趋势，这些特性有利于固定化酶的直接使用。 利用海藻酸钙-明胶凝胶包埋法固定化酶，以复原乳清为底物合成GOS，经单因素试验和响应面法(RSA)优化分析，当反应时间为2.0h，乳糖含量37.4％，温度为58.2℃，pH为5.0～6.0，加酶量为0.14％时，GOS得率最高，理论值为28.9％，经验证实验可以达到29.1％。1升的放大实验中GOS得率为28.3％，与小试相差无几。 本论文证实海藻酸钙—明胶凝胶包埋法可以制备活力回收率较高的固定化乳糖酶，并且具有较好的操作稳定性，该酶可以用于处理高浓度乳清，合成GOS，并具有进一步扩大试验的价值。