乳酸菌素Lacticin 518的分离纯化及其理化性质研究

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乳酸菌细菌素在食品防腐剂和医药领域有着广泛的应用前景,细菌素的分离纯化是研究其分子结构及遗传学特性的重要基础。论文研究了乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp. Lactis)Lactc518所产的乳酸菌素Lacticin518的分离纯化工艺和理化特性。   摸索了乳酸菌素Lacticin518的纯化方法,采用饱和度为40%硫酸铵沉淀处理发酵上清液。之后进行SephadexG-50凝胶过滤层析,流速为1.2mL/min。活性峰再进行疏水作用层析,使用苯基预装柱HiPrepTM16/10 Phenyl(low,sub),柱体积为20mL,流速7.0mL/min。结合缓冲液A为50mmol/L pH6.0PBS缓冲液,含2mol/LNaCl;洗脱缓冲液B为50mmol/LpH6.0PBS缓冲液。以60mL缓冲液A冲洗,;60mL缓冲液进行梯度洗脱:B的浓度70%-100%(实际是NaCl浓度的由30%降到0),140mL缓冲液B洗脱。活性峰用制备型反相高效液相色谱进行制备,梯度洗脱条件为0-5min:100%流动相A洗脱;5-27min:流动相B从O到100%:27-35min:100%的流动相B洗脱:流速:3.0mL/min。流动相A为双蒸水,流动相为乙腈,均含有0.1%TFA(v/v)。采用上述流程,得到了单一活性峰,比活力提高了236.718倍,得率为1.021%。   测定了乳酸菌素Lacticin518的表观分子量。经Tricine-SDS-PAGE电泳检测Lacticin518的凝胶过滤层析活性峰,结果显示其表观分子量处于4.1kDa至6.5kDa之间。   研究了乳酸菌素Lacticin518的抑菌谱,结果表明乳酸菌素Lacticin518对乳杆菌Lactb0801、植物乳杆菌、乳酸片球菌、戊糖乳杆菌、瑞士乳杆菌、短乳杆菌、食果糖乳杆菌、粪肠球菌、嗜热链球菌、四联球菌、苏云金芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌有抑制作用;对革兰氏阳性菌中的乳酸乳球菌乳脂亚种、干酪乳杆菌无抑制作用;对鸡白痢沙门氏菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、普通变形杆菌等革兰氏阴性菌无抑制作用。   研究了乳酸菌素Lacticin518的pH活性范围,结果表明在pH3-8范围内乳酸菌素Lacticin518都有抑菌能力。   研究了乳酸菌素Lacticin518在不同pH值下对热的稳定性,结果表明乳酸菌素Lacticin518在酸性条件下对热稳定;在碱性条件下对热不稳定,活性会随着温度的升高而逐渐下降,在pH8时100℃处理后活性完全消失。   研究了乳酸菌素Lacticin518对酶的敏感性,结果表明乳酸菌素Lacticin518对糜蛋白酶、木瓜蛋白酶、链霉蛋白酶E、蛋白酶K敏感;对胰蛋白酶、胃蛋白酶不敏感。
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