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论文以从生姜中分离提取出具有多种药物活性的6-姜酚单体为目标,着重研究了应用高效液相色谱分离制备6-姜酚单体的最佳色谱条件。并对姜油树脂的提取、粗姜酚的制备、6-姜酚色谱馏分的脱溶剂、产物结构表征和纯度分析以及高效液相色谱法测定生姜中的6-姜酚等五个方面,进行了较为详细的讨论。论文最后建立了生姜中6-姜酚单体的分离制备工艺流程,使用该流程可得到纯度大于98%的6-姜酚单体,方法总回收率为51.4%。论文具体内容及结论如下:
选用有机溶剂浸泡法制备姜油树脂。试验发现,6-姜酚主要是在最初24h内浸出的,在所选用的四种有机溶剂—甲醇、乙醇、丙酮和乙醚中,以丙酮为浸取剂所制得的姜油树脂纯度最高,所以选择丙酮做浸取剂,加入量按照1.0g姜粉加20mL丙酮的比例加入,浸取时间定为24h。
论证了加氢氧化钠萃取,再加酸使其游离出来转溶于有机溶剂的传统酚类物质分离方法应用于6-姜酚分离的可行性。结果认为此法不适用于6-姜酚分离,原因可能是氢氧化钠的加入促使并加速了姜酚侧链官能团处发生裂解反应所致。
采用柱色谱纯化姜油树脂来制备粗姜酚,运用正交实验对柱色谱制备粗姜酚的试验条件进行了优化。实验中借助GC-MS检测技术,明确了目标产物6-姜酚在ψ(溶剂A:溶剂B)=1:4馏分段。
探索了分析型HPLC分离6-姜酚的最佳色谱条件,并对其进行了放大实验。使用C18色谱柱(25mm×300mm,15μm),以ψ(溶剂C:溶剂D:水)=60:1:39做流动相,在流速10mL/min、最佳进样量30mg的色谱条件下,成功地从粗姜酚中分离出6-姜酚。产品经UV、FT-IR、GC-MS、NMR四大谱综合解析后被证实是6-姜酚,其纯度经HPLC定量分析后为99.61%,高于Biomol公司产品纯度(98%)。
建立了高效液相色谱测定生姜中6-姜酚的分析方法,并对该方法进行了条件实验和系统考查。使用色谱柱(μBondpakC18,3.9mm×300mm,10μm),以ψ(甲醇:冰醋酸:水)=40:1:59做流动相,在流速1.0mL/min、检测波长280nm、进样体积5μL的色谱条件下,定量分析6-姜酚。以6-姜酚浓度对峰面积作图,所得线性回归方程的线性相关系数R=0.9999,线性范围:1.3×10-3~1.76mg/mL。回收率大于98%,RSD小于1.0%。