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Rhox5是Rhox同源异型框基因簇中的主要成员,其在胚胎发育、生殖系统的发育、精子的形成和成熟过程中发挥着重要作用。有研究表明,Rhox5在多种肿瘤细胞中存在异常表达,但其具体功能和作用机制仍不清楚。实验室前期工作利用酵母双杂交技术发现Rhox5与前列腺癌相关蛋白PSAP存在相互作用。这提示,Rhox5可能在前列腺癌的发展进程中扮演着某种角色。基于此,本课题首次将Rhox5与前列腺癌关联,研究Rhox5对前列腺癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制。首先,我们采用RT-PCR和Western Blot的方法确认Rhox5在前列腺癌细胞TRAMP-C2中的表达。然后,通过荧光筛选和Western Blot筛选得到靶向Rhox5的有效siRNA序列,并以此为基础构建Rhox5的shRNA真核表达载体,建立Rhox5稳定沉默前列腺癌细胞系。然后,我们采用MTT法检测稳定细胞系的增殖以及P13K特异性抑制剂LY294002预处理后细胞的增殖情况；用Annexin V/PI双染法流式细胞仪检测无血清诱导条件下的细胞凋亡情况；并用Western Blot检测稳定细胞系中Akt的磷酸化水平。结果发现,与对照组相比,稳定沉默Rhox5的前列腺癌细胞增殖明显加快(p<0.01),而LY294002预处理后则较对照组无明显差异；此外,稳定沉默Rhox5的前列腺癌细胞的凋亡率明显降低(p<0.05),Akt磷酸化水平明显升高。这些结果表明,Rhox5可以抑制前列腺癌细胞增殖并促进其凋亡,而这可能是通过PI3K/Akt信号通路进行调控的。为进一步探讨Rhox5功能发挥的作用机制,我们用Co-IP的方法研究了Rhox5与PSAP在前列腺癌细胞中的内源性相互作用,并用Western Blot检测了稳定前列腺癌细胞系培养上清中PSAP的表达以及PSAP对PI3K/Akt信号通路的活化作用。结果发现,Rhox5在前列腺癌细胞中可以与PSAP内源性相互作用；Rhox5的沉默上调了培养上清中PSAP的表达；此外,PSAP还被证实可以在鼠前列腺癌细胞中激活PI3K/Akt信号通路。这些结果提示,Rhox5可能通过与PSAP结合抑制PSAP的胞外分泌,从而抑制由PSAP诱导的PI3K/Akt信号通路的活化,进而抑制前列腺癌细胞的增殖、促进其凋亡。但这尚需进一步实验验证。综上所述,本研究首次发现了Rhox5在前列腺癌细胞中的表达,并发现Rhox5能够抑制前列腺癌细胞增殖并促进其凋亡,而这可能是通过PI3K/Akt信号通路进行调控的。此外,本研究还发现Rhox5在前列腺癌细胞中可以与PSAP内源性相互作用,且Rhox5影响PSAP在细胞培养上清中的表达,从而提出Rhox5可能通过与PSAP结合抑制PSAP的胞外分泌而实现对前列腺癌细胞的增殖抑制和凋亡促进作用。