【摘 要】
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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis Mtb)中类泛素蛋白Pup(Prokaryoticubiquitin-like protein)-蛋白酶体系统是胞内蛋白降解重要机制，在去酰胺酶Dop(Deamidase of Pup)
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结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis Mtb)中类泛素蛋白Pup(Prokaryoticubiquitin-like protein)-蛋白酶体系统是胞内蛋白降解重要机制，在去酰胺酶Dop(Deamidase of Pup)和连接酶PafA(Proteasome accessory factor A)、ATP酶Mpa(Mycobacterial proteasome ATPase)等辅助因子的作用下，Pup可以共价标记多种功能蛋白，并介导被标记蛋白通过蛋白酶体降解，靶蛋白涉及物质中间代谢、信号通路、毒性和抗毒性因子、细胞壁和细胞膜组份等多个方面，并且与结核分枝杆菌的致病性相关，被认为是新的结核病治疗药物靶点，因此本领域研究具有深远的意义。
本文以Mtb为研究对象，优化并克隆出pup基因，同时克隆出dop、pafA和底物蛋白fabD基因，将这些基因加上用于纯化的标签构入表达载体，得到pGEX-2T-his6-pup,pET21cc-dop-his6,pET21cc.fabD-his6,pET21cc-pafA-his6,pBAD-pafA-his6重组表达质粒。通过重组蛋白技术，在大肠杆菌BL21中诱导表达出GST-His6-Pup、Dop-His6、FabD-His6和PafA-His6蛋白，并分别通过常规和变复性等方法纯化出这些蛋白，用蛋白免疫印迹等技术鉴定了这些蛋白，为建立Pup-蛋白酶体体外蛋白降解系统提供了蛋白。合成Pup的N端十肽免疫兔，得到能识别Pup蛋白且有较高效价的Pup多克隆抗体。对Mtb的非致病同源菌耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis，Msm)的dop基因敲除进行了初步探索，为进一步研究Pup-蛋白酶体系统参与的细胞调控功能做准备。
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