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目的:糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是一种严重的糖尿病微血管并发症,也是引起终末期肾病的首要原因。课题组前期研究发现miR-146b可能是急性肾损伤早期诊断及预后标志物,在此我们进一步探究人脐带间充质干细胞来源的外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell-derived exosomes,hucMSC-Ex)延缓DKD中miR-146b的作用机制,为hucMSC-Ex的临床应用提供新的实验依据。方法:以高脂饮食及链脲佐菌素(STZ)诱导构建DKD大鼠模型,正常SD大鼠(Normal组)为对照,取造模后8、16、24周肾组织,通过HE染色及Masson染色验证DKD模型构建成功;体外高糖环境下培养三种肾细胞,即大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)、大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)和大鼠足细胞(podocyte);提取大鼠肾组织及体外培养的肾细胞RNA检测miR-146b表达量。通过大量文献阅读及TargetScan软件预测miR-146b靶基因为NF2(2型神经纤维瘤),编码Merlin蛋白,双荧光素酶报告基因实验进行验证。过表达/抑制HBZY-1细胞中miR-146b的表达,Western Blot、qRT-PCR及细胞免疫荧光验证下游Hippo/YAP信号通路。用hucMSC-Ex对体内外模型进行干预治疗,qRT-PCR检测各组miR-146b表达量,Western Blot与qRT-PCR检测Merlin、YAP及纤维化指标α-SMA的表达,免疫组化分析Merlin在肾组织中的表达,细胞免疫荧光检测各组Merlin/YAP荧光强度。通过StarBaseV2.0软件筛选miR-146b上游分子,确定circ-0002940分子为进一步研究对象,qRT-PCR检测其在hucMSC及hucMSC-Ex中的表达,并通过双荧光素酶报告基因实验及siRNA转染实验,确定了circ-0002940对miR-146b/Merlin/YAP通路的作用。结果:HE染色及Masson染色结果显示DKD建模成功,miR-146b在16周DKD组表达明显升高,同时随着疾病进展逐渐升高;体外实验结果显示miR-146b主要在HBZY-1中表达较高,双荧光素酶报告基因实验证明Merlin为miR-146b的靶基因。此外,转染miR-146b模拟物(mimics)及抑制物(inhibitors)验证下游通路,结果表明过表达miR-146b后Merlin表达下降,YAP上调,而抑制组则相反。体内外实验结果均显示经hucMSC-Ex干预治疗后miR-146b表达下降;Western Blot与qRT-PCR结果显示在DKD组Merlin表达下调、YAP与α-SMA表达上调;hucMSC-Ex处理组Merlin增加,而YAP与α-SMA则表达下降;免疫组化结果显示Merlin在DKD肾组织的表达明显减弱,而在hucMSC-Ex组表达增强,细胞免疫荧光结果显示30mM高糖组Merlin蛋白荧光强度降低,YAP蛋白荧光强度升高,并且入核增多;hucMSC-Ex组则相反。通过筛选得到miR-146b上游分子为circ-0002940,双荧光素酶报告基因验证两者之间存在靶向关系,转染siRNA后circ-0002940表达明显下降,而Merlin下调,YAP与α-SMA上调,说明hucMSC-Ex能通过circ-0002940与miR-146b的海绵作用调控Hippo/YAP信号通路。结论:miR-146b在糖尿病肾病体内及体外模型中表达升高;miR-146b的下游靶基因为Merlin,通过Hippo/YAP信号通路在糖尿病肾病中发挥作用。hucMSC-Ex可能通过circ-0002940分子抑制miR-146b的作用,改善肾功能。