有机砷制剂(如阿散酸)越来越广泛的使用,促进了畜牧业的发展,取得了良好的社会经济效益。但由于动物对砷有蓄积作用,长期饲喂阿散酸,会导致动物产品中砷含量残留超标。肉类兽药残留问题已经引起了广泛的关注。现今的研究基本上集中于快速筛选分析与检测等验证性的分析方法,但这些研究都没从根本上阐述肉类兽药残留再畜禽体内引发的各种变化的生物学机制,因此,迫切需要找到一种分析方法,能够直观与系统地反映兽药在畜禽体内的代谢情况。近年来,蛋白质组学的研究成为探索生物体各种动态的生物学机制的有效手段,双向电泳和质谱技术作为蛋白质组学分析的重要工具,可以直观快速地发现蛋白质的各种差异和变化。本实验运用双向电泳,对仔猪肝脏的蛋白质表达进行分析,以探索阿散酸在猪体内的生物学机制,从而根本上阐述该种兽药残留对于猪的各种影响。为能够比较直观地反映有机砷制剂在畜禽体内的代谢情况,以正确控制该兽药在猪饲养过程中的应用,提供了新的思路。1、分别对猪肝脏的电泳参数、样品处理、染色方法、凝胶孔径、蛋白上样量、IPG胶条的选择等方面对双向电泳的做了优化,建立了猪肝脏蛋白质的双向电泳体系。确定双向电泳条件为：超速离心法,Clean up试剂盒处理,17cm pH5-8IPG胶条,样品蛋白上样量120μL。上述条件优化建立的双向电泳图谱的重复性良好,匹配率达到76%±1.7%,点有1412±8个,已经达到后续实验分析的要求。2、参照全盲法,对各种不同的猪肝脏样品进行准确性和重复性试验,样品的匹配率都在70%以上,且图谱中点的相对迁移率都在实验室的控制标准之内,可以筛选出既具有统计学意义又具有量分析意义的蛋白点,也可以用于区分不同的猪肝脏样品。表明本实验建立的猪肝脏蛋白质双向电泳体系能满足不同猪肝脏样品的双向电泳分析。3、单因子完全随机化试验下阿散酸对仔猪肝脏蛋白质的影响。建立了具有良好重复性和稳定性的仔猪肝脏蛋白质双向电泳图谱,针对对照组和试验组仔猪肝脏蛋白质双向电泳表达图谱比较,用PDQuest软件进行差异分析,结果得到兼具统计学意义和分析意义的差异蛋白点共13个,均为上调蛋白质。4、对对照组和试验组仔猪肝脏蛋白质双向电泳图的13个差异蛋白点进行质谱MS+MS/MS分析,用MASCOT软件搜索与之相匹配的蛋白质,成功鉴定12个点,得到10种蛋白质,分别为分别为Chain B,Refined1.8Angstroms Resolution Crystal Structure Of Porcine Epsilon-Trypsin, Rho GDP dissociation inhibitor alpha, PREDICTED:hypothetical protein LOC100512997, PREDICTED:26S proteasome non-ATPase regulatory subunit13-like, PREDICTED:LOW QUALITY PROTEIN:heat shock cognate71kDa protein-like, PREDICTED:synaptic vesicle membrane protein VAT-1, cytoskeletal beta actin, PREDICTED: actin,cytoplasmic1,PREDICTED:actin,cytoplasmic和cathepsin B precursor。分析这些蛋白质的功能,探索阿散酸对仔猪肝脏蛋白质表达的影响发现,这些蛋白质与阿散酸在肝脏中的代谢及其对机体的一系列损伤有密切的相关性。