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乳腺癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一,其全球发病率自上世纪70年代开始一直呈现上升趋势。乳腺癌细胞由于具有无限增殖、迁移性和侵袭性等特点,如果在乳腺癌发展后期才被检查出,往往很难治愈。因此深入探究乳腺癌细胞的各类信号通路以及寻找其中的靶基因十分重要。转录因子FOXA1属于叉头框FOX转录因子家族成员之一,与细胞的增殖、分化、胚胎成长、器官发育、肿瘤的发生发展等生理过程息息相关。大量研究结果表明,在肿瘤细胞中,FOXA1的表达情况与肿瘤分子分型和恶性程度高度关联。我们猜测FOXAl能调控细胞EMT相关基因的表达,可能是关键调控因子之一。本文主要研究FOXA1在乳腺癌细胞中的调控机制和互作蛋白的初步筛选鉴定。首先我们从临床样本出发,检测了实验室有的几十种临床样本的FOXA1、E钙粘素、波形蛋白的蛋白表达水平,发现在临床样本中FOXA1与上皮类型标志物E钙粘素的蛋白表达呈正相关,与间质类型标志物波形蛋白表达呈负相关。随后检测了实验室不同类型乳腺癌细胞中的FOXA1、E钙粘素、波形蛋白的蛋白和mRNA表达水平,发现在乳腺癌细胞中FOXA1表达高的细胞类型E钙粘素表达量也高,但波形蛋白表达水平低,由此我们得出在乳腺癌细胞中转录因子FOXA1与上皮表型相关的结论。ZEB2可以直接抑制E钙粘素的表达,我们推钡FOXA1可能参与调控ZEB2的转录。根据细胞FOXA1表达水平的不同,我们选用乳腺癌E型细胞MCF-7和三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468作为细胞模型,在三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468中脂质体转染高表达FOXA1,发现ZEB2表达下降,上皮型标志物E钙粘素表达上升而间质型标志物波形蛋白表达下降。随后通过荧光素酶报告基因实验进行证实,发现FOXA1能够调控靶基因ZEB2的启动子并抑制其转录。为了寻找FOXA1的互作蛋白,更加深入的探究其在乳腺癌细胞信号通路中的功能,我们建立了His标签pull-down技术联合质谱分析的技术方法。首先我们构建了真核表达载体pcDNA3.1-His-FOXA1,在HEK293T细胞内瞬时转染高表达His-FOXA1蛋白,通过His标签pull down技术分离出FOXA1蛋白复合物,跑胶酶解后质谱分析鉴定样品中与转录因子FOXA1相互作用的蛋白质。通过数据库分析我们筛选出了8个可能与FOXA1互作的蛋白。这些研究为进一步研究FOXA1在乳腺癌细胞信号网络中的互作关系及调控功能奠定了前期基础。