【摘 要】
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猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种对养猪业造成巨大损失的高致死率的传染性疫病。PEDV防控困难,其疫苗效果有限,并且由于PEDV毒株的高变异性及不同基因型分离株混合感染的存在,疫苗仍然不能使仔猪完全避免PEDV的影响。开发有效的PEDV防控手段对养猪业良性发展具有重要意义。本文基于2017年所报道的CRISPR-C
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猪流行性腹泻是由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）引起的一种对养猪业造成巨大损失的高致死率的传染性疫病。PEDV防控困难,其疫苗效果有限,并且由于PEDV毒株的高变异性及不同基因型分离株混合感染的存在,疫苗仍然不能使仔猪完全避免PEDV的影响。开发有效的PEDV防控手段对养猪业良性发展具有重要意义。本文基于2017年所报道的CRISPR-Cas13系统可以对RNA进行精确的切割和编辑的作用机理,探索一种靶向抑制RNA病毒的策略。我们分别采用了Cas13家族的Cas13a和Cas13b系统,利用其RNA干扰功能对PEDV的基因组RNA进行切割,研究其干扰PEDV体外增殖的可能性。其中,基于Cas13a系统设计了6对靶向PEDV基因组不同区域的CRISPR RNA（cr RNA）位点,通过构建CRISPR-Cas13a打靶质粒,以打靶质粒转染Vero细胞,并利用PEDV感染转染后细胞,检测PEDV在CRISPR-Cas13a转染细胞内的增殖情况。结果显示,CRISPR-Cas13a系统对PEDV增殖无明显的抑制作用。而基于Cas13b系统设计了4对靶向PEDV基因组不同区域的cr RNA位点,通过构建CRISPR-Cas13b打靶质粒,以打靶质粒转染Vero细胞,并利用PEDV感染转染后细胞,结果显示了对PEDV增殖明显的抑制作用,打靶质粒Cas13b-PEDV-cr RNA3和Cas13bPEDV-cr RNA4在24 h内细胞水平上降低了约50%的PEDV病毒含量。我们还构建稳定转染Cas13b-PEDV-cr RNA2和Cas13b-PEDV-cr RNA3打靶质粒的Vero细胞系,在PEDV感染细胞后,24 h内对PEDV增殖的抑制作用达到90%以上。本研究结果显示了CRISPR/Cas13b系统可显著抑制PEDV病毒在Vero细胞上的增殖,显示了CRISPR/Cas13b系统具有抵抗动物RNA病毒感染的能力。本研究为开发有效的RNA病毒防控手段、建立抗病动物模型提供了新的研究策略。
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由茄科劳尔氏菌（Ralstonia solanacearum）引起的烟草青枯病是烟草上的重要细菌病害,给烟草行业带来巨大损失,目前尚未有效的防治措施。噬菌体作为细菌病毒,能有效裂解青枯菌,但由于噬菌体存在高度特异性等问题,影响其防治细菌病害的效果。因此,研究噬菌体与细菌之间的互作,探究噬菌体抗性菌株的抗性机制,对于利用噬菌体防治作物青枯病具有重要意义。为明确青枯菌可能存在的抗噬菌体机制,将对6个噬
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