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细胞表面的糖链与蛋白质之间的相互作用参与了脊椎动物的胚胎发育,促进了细胞与细胞间的黏附,这些能够与糖链相互作用的蛋白质被称为糖结合蛋白。糖芯片技术是将糖链作为探针固定到载体上,用于检测糖结合蛋白的一类生物芯片技术。目前一张芯片上连接的糖的种类非常有限。因此,寻求更多获取糖链探针的来源以及有效固定探针的方法对糖芯片技术的发展有重要意义。本实验利用二硫苏糖醇和碘乙酰胺依次处理原样蛋白质后,用胰蛋白酶进行酶切。通过滤膜辅助法利用凝集素从上述酶切产物中提取含有特定糖链结构的糖肽。利用糖肽N-端的氨基与环氧基团的反应,将其共价固定到环氧化修饰的载玻片上,制备糖肽芯片。将Cy3标记的蛋白质样本与糖肽芯片进行孵育,扫描孵育后芯片上的荧光信号值,分析比较糖结合蛋白的变化。本实验最终确定制备糖肽芯片的最佳点样缓冲液是pH9.3的0.1M的Na2C03缓冲液;最佳芯片点制湿度是45%;最佳芯片烘干温度是37℃下烘干3h;最佳封闭缓冲液是含有1%BSA和0.05%Tween-20的磷酸盐缓冲液:最佳孵育缓冲液是含有1%BSA(v/v)、0.05%Tween-20和0.58%NaCl磷酸盐缓冲溶液。利用建立的糖肽芯片检测糖结合蛋白的方法,分别对健康志愿者、乙肝、肝硬化、肝癌患者唾液和血清进行了分析。发现在肝癌发展过程中,人唾液中有4种糖链结构识别的糖结合蛋白发生了变化:糖链结构Terminal in GalNAc and Gal和Galαl-3(Fucαl-2)Gal所识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者唾液中均较健康志愿者发生了显著上调;糖链结构Bisecting GlcNAc,biantennary complex-type N-glycan with outer Gal 所识别的糖结合蛋白在肝癌患者唾液中比健康志愿者发生了显著上调;糖链结构(GlcNAc)n,high mannose-type N-glycans在肝癌患者唾液中比肝硬化患者发生了显著下调。在人血清中有9种糖链结构识别的糖结合蛋白发生了变化:糖链结构Galβ-1,4GlcNAc(type Ⅱ),Gaiβ1-3GlcNAc(type Ⅰ)和 Bisecting GlcNAc,bi-antennary N-glycans,tri-and tetra-antennary complex-type N-glycan识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者均发生了显著上调。糖链结构High-Mannose,Manαl-3Man,Manα1-6Man,Man5-GlcNAc2-Asn 和 terminating in GalNAcα/β1-3/6Gal 识别的糖结合蛋白均在乙肝患者血清中比健康志愿者发生了显著下调。糖链结构GlcNAc and agalactosylated tri/tetra antennary glycans识别的糖结合蛋白在肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者发生了显著上调,在肝硬化患者血清中比乙肝患者发生了显著上调,在肝癌患者血清中比肝硬化患者发生了显著上调。糖链结构Terminal in GalNAc and Gal和α-Gal,α-GalNAc,Galα-1,3Gal,Galα-1,6Glc识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者均发生了显著下调。糖链结构Galα1-3(Fucα1-2)Gal识别的糖结合蛋白在乙肝、肝硬化、肝癌患者血清中比健康志愿者发生了显著下调,在肝癌患者血清中比乙肝、肝硬化患者发生了显著上调。糖链结构Multivalent Sia and(GlcNAc)n识别的糖结合蛋白在肝硬化患者血清中比健康志愿者、乙肝患者发生了显著上调。利用含有糖链结构Galα1-3(Fucα1-2)Gal的糖肽制备糖肽-磁粒复合物分别从健康志愿者、肝癌患者唾液和血清中提取糖结合蛋白进行LC-MS/MS分析。在健康志愿者唾液中提取的39个糖结合蛋白有34个检测到GO条目;血清中提取的33个糖结合蛋白有31个检测到GO条目。肝癌患者唾液中提取的40个糖结合蛋白有35个检测到GO条目;血清中提取的67个糖结合蛋白有54个检测到GO条目。