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目的:探讨大承气汤对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4的影响,为进一步揭示大承气汤治疗脓毒症的分子机制提供依据。
方法:在动物实验研究中,我们制作大鼠盲肠结扎穿孔(CLP)模型复制脓毒症。将50只健康雄性SD大鼠随机分为5组,分别为:正常对照组(n=10)、假手术组(n=10)、CLP组(n=10)、低剂量大承气汤干预组(n=10)和高剂量大承气汤干预组(n=10)。假手术组开腹轻扰肠管后关腹,CLP组、低剂量大承气汤组、高剂量大承气汤组均为脓毒症模型。高剂量和低剂量大承气汤组在术前2小时和术后10、20小时以不同剂量大承气汤灌胃。术后12小时在每组中随机抽取5只大鼠,处死后提取肝脏组织总RNA,进行逆转录和荧光定量PCR测定TLR4mRNA的表达。余大鼠分别在术后第2、6、12、24小时采取动脉血,用ELISA法检测大鼠血浆细胞因子IL-6、TNF-α含量。对所得数据进行统计分析。
结果:
1、肝脏组织TLR4 mRNA的表达:正常对照组大鼠肝脏无TLR4 mRNA的表达,假手术组大鼠术后12小时肝脏有少量TLR4 mRNA的表达,CLP组大鼠术后12小时肝脏TLR4 mRNA的表达明显增多,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01),低剂量大承气汤干预组大鼠术后12小时TLR4 mRNA的表达明显低于CLP组(P<0.01),高剂量大承气汤干预组大鼠术后12小时TLR4 mRNA的表达明显低于CLP组(P<0.01),高剂量大承气汤干预组大鼠术后12小时TLR4 mRNA的表达低于低剂量大承气汤干预组(P<0.05)。
2、血浆IL-6检测:CLP组、低剂量大承气汤干预组和高剂量大承气汤干预组血浆IL-6水平均出现先升后降的趋势,其峰值均在术后6小时达到。比较6小时时间点各组IL-6水平显示:CLP组明显高于假手术组(P<0.01),低剂量大承气汤干预组明显低于CLP组(P<0.01),高剂量大承气汤干预组明显低于CLP组(P<0.01),且高剂量大承气汤干预组明显低于低剂量大承气汤干预组(P<0.05)。
3、血浆TNF-a检测:假手术组、CLP组、低剂量大承气汤干预组和高剂量大承气汤干预组中血浆TNF-a水平在术后2小时达到峰值,其后有逐步下降趋势。在2、6、12小时时间点假手术组、CLP组、低剂量大承气汤干预组和高剂量大承气汤干预组中各组血浆TNF-a水平均有差异(P<0.05),在24小时时间点,低剂量大承气汤干预组和高剂量大承气汤干预组组间无差异(P>0.05),但高剂量大承气汤干预组和CLP组之间仍有差异(P<0.05)。
结论:动物实验表明,脓毒症大鼠肝脏TLR4 mRNA的表达、血浆炎症介质TNF-a和IL-6的表达均升高,提示TLR4、TNF-a和IL-6与脓毒症发生有关:大承气汤可抑制脓毒症大鼠肝脏TLR4mRNA的表达,同时抑制其下游炎症介质TNF-a和IL-6的表达,抑制效果存在剂量依赖关系,提示大承气汤治疗脓毒症与其直接或间接抑制TLR4mRNA的表达有关。