纤维化(fibrosis)是指在一个器官或组织为修复或反应过程而过度形成纤维结缔组织的自然过程。急性和慢性炎症往往会引发纤维化,导致上皮细胞损伤,使炎症介质包括细胞因子、趋化因子和其他因子过度释放。炎症也会影响免疫平衡,妨碍组织修复、再生及纤维化的进程。肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)是一种慢性、不可逆性肺部消耗性疾病,致使患者出现呼吸困难、血氧过低等症状并最终因呼吸衰竭而死亡。目前肺纤维化的发病率和致死率均在增加,但由于其病理机制复杂,仍缺乏有效的治疗手段。冬虫夏草是我国传统的药用真菌,它是由冬虫夏草菌寄生于蝙蝠蛾幼虫而形成的幼虫尸体和干燥子座的复合体。据报道冬虫夏草菌丝体(Hirsutella sinensis mycelium,HSM)具有抗氧化和抑制血管生成的作用,可用来治疗呼吸系统疾病。一些研究表明HSM可通过抑制TGF-β1表达及促进胶原降解缓解肝肾肺纤维化功能。可是,关于HSM在抗肺纤维化中的作用及其机制还不明确。因此,本研究评价了 HSM缓解肺纤维化的作用效果,并探讨了 HSM在抗纤维化中的潜在作用机制。1、发现HSM能够通过抑制炎症及调控免疫反应缓解CLP诱导的脓毒症:为了确定HSM的抗炎效果,我们建立了脓毒症(sepsis)模型。脓毒症是由革兰氏阳性/阴性菌感染引起的系统性炎症反应综合征,是导致重症病人死亡的重要原因之一。盲肠结扎穿刺(CLP)是一种能够产生所有脓毒症症状的实验模型,因此,我们首先构建了 CLP诱导的脓毒症模型来了解HSM对脓毒症小鼠的炎症反应及免疫调节的影响。结果表明,HSM可抑制小鼠肝肺肾炎性因子的产生、改善其组织病理损伤以及影响免疫细胞亚群的数量,显示出了较好的治疗效果,提示HSM具有抑制炎症、调控免疫的作用。此外,脓毒症导致肺部损伤,出现肺纤维化,HSM表现出了对纤维化病变的治疗作用。提示HSM可能通过抑制肺纤维化早期出现的肺泡炎实现改善了肺纤维化的目的。2、发现HSM能够改善博来霉素(BLM)诱导肺纤维化的症状:博来霉素(BLM)诱导的肺纤维化是更为理想的实验模型,为了进一步确定HSM缓解肺纤维化的效果,我们构建了 BLM诱导的肺纤维化模型,分析了 HSM对肺纤维化发病进程的改善作用。结果显示,HSM可显著降低肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量、抑制肺部炎性因子和纤维化因子的产生以及改善肺组织病理损伤;此外HSM还减少了巨噬细胞趋化并调节免疫失衡,对肺纤维化显示出良好的治疗效果。3、发现HSM能通过抑制mTOR信号通路p70S6K磷酸化影响肺纤维化的发生:为了研究HSM缓解肺纤维化的机制,我们用Q-PCR法测定HSM对TGF-β1诱导A549的纤维化相关因子mRNA表达的影响;结果显示HSM明显抑制TGF-β1诱导的 A549 表达 vimentin 和 fibronectin;用 Western Blot 法分析了 HSM对BLM诱导肺纤维化模型小鼠肺组织以及TGF-β1诱导A549的mTOR下游p70S6K磷酸化表达的影响,发现HSM能有效抑制p70S6K磷酸化。提示HSM有望成为治疗肺纤维化的有效药物,且可能由抑制p70S6K磷酸化影响mTOR信号通路而达到。综上所述,发现HSM具有调节免疫细胞功能,抑制炎症,以及缓解肺纤维化的作用;HSM影响肺纤维化的发生可能与其抑制mTOR通路p70S6K磷酸化密切相关。