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目的:采用荧光定量PCR方法,观察比较不同浓度组祛疣合剂作用于离体尖锐湿疣组织后,HPV含量的变化,为中药制剂祛疣合剂的抗病毒作用提供理论依据。
方法:从我院皮肤科、妇科、肛肠科门诊及住院部,采集尖锐湿疣患者外阴或肛周部位符合临床诊断标准的疣体多个。采用外科常规手术切除法,切除患者的疣体活组织,用生理盐水洗去血迹。分别将其放入无菌试管中,用精密电子天平精确称重30mg。在各个试管中加入5ml的生理盐水,用玻璃匀浆器研磨疣体组织,后将试管放置于H-1混合器上进行充分的震荡,使组织混合均匀,使其制备成6mg/ml组织匀浆以备用。先检测出符合标准的30个HPV6、11型标本。然后用移液枪从无菌试管中的每一组织匀浆标本中,提取3等分25μl尖锐湿疣(简称:CA)组织匀浆至1.5ml的各个离心管中,分成3组。第一组为生理盐水对照组,其余两组各个标本中分别加入高低不同浓度的祛疣合剂药液25μl。将各个离心管用力震摇均匀,使CA组织匀浆与不同浓度祛疣合剂药液充分作用。将所有离心管放置于37℃水浴箱中进行培养。24小时后,将三组组织匀浆分别取出,采用FQ-PCR技术检测每组各个标本中HPV的含量。其定量结果由电脑自动分析计算出,通过相关软件分析定量结果。通过观察比较不同浓度组祛疣合剂作用于离体尖锐湿疣组织后,HPV含量的变化,说明中药制剂祛疣合剂对尖锐湿疣组织HPV的抗病毒作用。
结果:一般情况显示:病毒数量,经各组之间两两分析,生理盐水组与药物组之间有差异,P<0.01,有统计学意义,即病毒数量有明显变化;低浓度组和高浓度组有差异即高浓度组效果优于低浓度组,P<0.05。
结论:1.祛疣合剂药物组对尖锐湿疣组织中HPV有明显的杀灭作用。2.祛疣合剂对尖锐湿疣组织中HPV的杀灭作用,随着浓度的增高而增强。