衰老是生物体内发生的渐进性多器官、多层次、多方面的复杂变化过程，其后果是机体功能的衰退或失调。机体衰老的基础是细胞的衰老，这一过程受遗传和环境因素的共同调节。目前，虽然有多种学说从不同方面解释衰老的发生，但其关键机制以及调控方式仍不明确。　　沉默信息调节因子2同源物1(Silent mating type information regulation2 homolog1，SIRT1)是一个NAD+依赖的组蛋白脱乙酰基酶，经其去乙酰化作用影响P53，P16， FOXO，NF-κB，和 PGC-1α等不同的下游分子，进而对细胞的衰老、程序性死亡、新陈代谢等不同过程进行调控。研究发现SIRT1在热量限制（Caloric restriction，CR）引起的生命周期的延长中发挥了关键作用，从而引发了研究者的广泛兴趣。在体外， SIRT1能够抑制氧化应激和高糖诱导的内皮细胞以及干细胞的衰老；在啮齿类动物的相关研究也发现，SIRT1在衰老过程以及年龄依赖的器官功能下降中发挥重要作用。然而SIRT1对部分下游分子，甚至生理或病理进程的作用研究常常存在相互矛盾的报道。这提示SIRT1的功能可能存在更加复杂的机制和调控因素。　　SIRT1的序列高度保守，且长期被认为不存在剪接变异体。但2010年Lynch等的研究显示人类及小鼠的SIRT1 pre-mRNA存在选择性剪接，即产生缺失第八外显子的SIRT1（SIRT1-ΔExon8）和SIRT1全长（SIRT1-FL）两种变异体。新近研究发现， SIRT1-ΔExon8的生物学作用及调控机制与SIRT1-FL存在较大差异。在前期的实验过程中，我们发现大鼠体内可能也存在 SIRT1的选择性剪接，由于大鼠与人和小鼠的SIRT1结构不同，后者具有9个外显子，而大鼠具有8个外显子，因此其产生的选择性变异体也不同。实验显示，大鼠可能产生与小鼠或人SIRT1-ΔExon8的生物学作用与调控机制相似的缺失第七外显子的SIRT1（SIRT1-ΔExon7）。已知SIRT1在衰老进程中发挥着重要作用，但其剪接变异体是否影响衰老进程目前尚无报道。本研究在前期实验的基础上，利用衰老的细胞模型和动物实验证实大鼠的选择性剪接，以及观察大鼠SIRT1的选择性剪接在衰老过程可能发挥的作用。　　第一部分 SIRT1-ΔExon8在D-半乳糖诱导的293T细胞衰老模型中的作用观察　　目的：　　通过观察缺失第八外显子的SIRT1选择性剪接变异体（SIRT1-ΔExon8）在D-半乳糖（D-gal）诱导的293T细胞衰老模型中的表达变化，初步探讨SIRT1-ΔExon8对细胞衰老进程的影响。　　方法：　　1.CCK8法测定不同浓度D-半乳糖（0，5，10，15，20 g/L）对293T细胞活力的影响。2.选取终浓度为10 g/L的D-半乳糖DMEM高糖培养基作用于第3代293T细胞，继续培养至第6代，建立细胞衰老模型，应用衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色方法观察衰老细胞的阳性率。3.RT-PCR检测诱导组与对照组细胞中SIRT1-FL及SIRT1-ΔExon8 mRNA的表达水平。　　结果：　　1.CCK-8结果显示10 g/L的D-半乳糖培养基能诱导细胞衰老且不引起细胞过度损伤。2.诱导组衰老细胞阳性率74.25±3.62％高于对照组7.68±1.43%（P<0.05）。3. RT- PCR结果显示诱导组SIRT1-FL和SIRT1-ΔExon8 mRNA表达水平分别较对照组降低了78.26±5.16%和88.03±3.27%（P<0.05）。　　小结：　　1. SA-β-gal染色结果提示D-半乳糖诱导的293T细胞衰老模型建立成功。2.衰老细胞组的SIRT1-FL以及SIRT1-ΔExon8 mRNA表达水平较对照组均显著降低，提示SIRT1-FL和SIRT1-ΔExon8可能参与调控细胞衰老进程。　　第二部分 SIRT1-ΔExon7在大鼠衰老过程中的表达改变及意义　　目的：　　证实大鼠海马组织中存在 SIRT1的选择性剪接变异体；观察 SIRT1全长及缺失第七外显子的 SIRT1选择性剪接变异体（SIRT1-ΔExon7）在不同年龄段大鼠海马组织中表达变化，从而初步探讨SIRT1全长及SIRT1-ΔExon7在衰老进程中的表达改变。　　方法：　　1.通过 PCR产物的凝胶电泳及 cDNA测序检测扩增目的基因是否为SIRT1-ΔExon7。2.将不同日龄(P7，P90，P720)大鼠海马组织进行冰冻切片，并应用SA-β-gal染色并观察细胞衰老阳性率。3. RT-PCR测定不同年龄段大鼠海马组织中SIRT1-FL及SIRT1-ΔExon7 mRNA的表达水平。　　结果：　　1.琼脂糖凝胶电泳及测序结果显示，大鼠海马组织存在SIRT1-ΔExon7的表达。2. SA-β-gal染色结果显示新生鼠偶见SA-β-gal阳性衰老细胞，而老年大鼠可见大量胞浆呈淡蓝色的SA-β-gal阳性衰老细胞，提示随年龄增加大鼠脑内细胞的SA-β-gal活性逐渐增强，衰老细胞呈年龄依赖性递增趋势。3. RT- PCR结果显示P90组及P720组SIRT1-FL mRNA表达水平与P7组相比均无明显差异；而SIRT1-ΔExon7 mRNA表达水平分别升高了77.40±7.38%和89.28±9.23%（P<0.05）。　　小结：　　1.大鼠体内存在缺失第7外显子的SIRT1选择性剪接变异体。2. SIRT1-ΔExon7在衰老海马组织中呈现高表达。　　第三部分 SIRT1-ΔExon7在诱导大鼠MSCs衰老细胞中的表达变化及意义　　目的：　　为了更进一步研究SIRT1以及SIRT-Δ7在衰老过程的作用，我们采用诱导大鼠骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cells，MSCs）衰老细胞模型，观察SIRT-Δ7在细胞衰老过程中的表达变化。　　方法：　　1.将MSCs细胞反复传代至第18代，β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色观察衰老细胞阳性率。2.RT-PCR检测衰老组与对照组细胞中SIRT1-FL及SIRT1-ΔExon7 mRNA的表达水平。　　结果：　　1.随着细胞不断传代 SA-β-gal阳性衰老细胞增加，衰老组细胞阳性率57.64%±7.39%明显高于对照组16.35%±2.17%（P<0.05）。2. RT- PCR结果显示衰老组SIRT1-FL mRNA表达水平较对照组降低了20.09±2.74%（P<0.05）；和SIRT1-ΔExon7 mRNA表达水平较对照组升高了132.85±11.07%（P<0.05）。　　小结：　　衰老细胞中SIRT1-ΔExon7表达显著升高，提示SIRT1-ΔExon7可能在衰老过程发挥作用。　　结论：　　1.首次证实大鼠存在 SIRT1的选择性剪接，形成选择性变异体 SIRT1-ΔExon7，而不是之前报道的SIRT1-ΔExon8。　　2.整体动物及离体实验（两种来源的细胞）均观察到衰老过程中 SIRT1-ΔExon7表达水平的改变，提示SIRT1的选择性剪接可能在衰老进程发挥作用。