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目的：评价减毒诺氏梭菌(C.novyi-NT)作为基因治疗载体在小鼠体内应用的靶向性与安全性。构建HER2/neu-IL12融合基因修饰的C.novyi-NT (HER2/neu-IL12-C. novyi-NT)。应用HER2/neu阳性小鼠乳腺癌模型探讨其对实体肿瘤的治疗作用。方法：(1)C.novyi-NT在正常小鼠体内分布：将C.novyi-NT芽孢悬液0.5ml(5×107个)经尾静脉注射给正常小鼠,分别于注射后1、2、4、7天处死4只小鼠,取其肝、肾、肺匀浆并厌氧培养,计算各器官中的细菌数。(2)C.novyi-NT在荷瘤小鼠体内分布：制备EMT6乳腺癌荷瘤小鼠模型,将C.novyi-NT芽孢悬液0.5ml(5×107个)经尾静脉注射荷瘤鼠体内,分别于注射后1、2、4、7天处死小鼠,无菌剥取瘤体、肝、肾和肺,匀浆并厌氧培养,计算瘤组织和各个器官中的细菌数。(3)C.novyi-NT的直接溶瘤作用：将C.novyi-NT芽孢悬液0.5ml(5×107个)经尾静脉注射荷瘤鼠体内,于注射后1、2、4、7天分别处死4只小鼠,无菌剥取瘤体、肝、肾和肺,组织经甲醛固定制作石蜡切片,HE染色观察肿瘤组织坏死区大小；革兰染色观察C.novyi-NT在肿瘤和各器官中的分布。(4)C.novyi-NT在小鼠体内应用安全性评价：将C.novyi-NT以静脉注射的方式给予正常小鼠(5×107个/只),注射后每天观察小鼠的摄食、饮水等情况,于第7天处死小鼠,剥取肝、肾和肺匀浆后做厌氧培养,计数各个器官中的细菌数；探讨C.novyi-NT在小鼠体内应用的安全性。(5)HER2/neu-IL12-C.C.novyi-NT制备：以超声(40kHz)介导的方式,将HER2/neu-IL-12(?)虫合基因穿梭质粒(pEHl)导入C.novyi-NT,经红霉素抗性筛选,获得HER2/neu-IL12-C.noyyi-NT。(6)HER2/neu阳性乳腺癌模型制备：采用PEI转染的方法将质粒pcDNA6-HER2/neu转染小鼠乳腺癌细胞EMT6,经杀稻瘟菌素(Blasticidin)筛选获得HER2/neu-EMT6(?)田胞,将其注射于小鼠右前肋部皮下,建立HER2/neu阳性乳腺癌模型。(7)HER2/neu-IL12-C.novyi-NT对HER2/neu阳性乳腺癌的治疗作用：HER2/neu阳性乳腺癌荷瘤小鼠24只,随机分为4组。每组6只。Ⅰ组：C.novyi-NT组;Ⅱ组：pEH1组；Ⅲ组：HER2/neu-IL12-C.novyi-NT组;Ⅳ组：PBS组。Ⅰ组注射C. novyi-NT悬液0.1ml(1×107个)；Ⅱ组注射pEH10.1ml(100μg);Ⅲ组注射HER2/neu-IL12-C.novyi-NT悬液0.1ml(1×107个)组；Ⅳ组注射0.1mlPBS。并于接种肿瘤细胞后第4、7、9、11、13、15天测量肿瘤的大小,绘制肿瘤生长曲线；第15天处死小鼠,剥取瘤体和脾脏称重,计算脾指数。评价HER2/neu-IL12-C. novyi-NT对HER2/neu阳性小鼠乳腺癌的治疗作用。结果：(1)C.novyi-NT靶向定位于肿瘤组织,并在其中持续大量增殖,单独应用即具有明显的溶瘤作用。(2)初步的安全性评价结果显示,C.novyi-NT在小鼠体内应用具有良好的安全性。(3)经菌液PCR鉴定结果显示,应用超声介导方式成功地将pEH1导入C.novyi-NT,获得HER2/neu-IL12-C.novyi-NT。(4)HER2/neu-IL12-C.novyi-NT对HER2/neu阳性乳腺癌小鼠治疗作用结果显示,前三组肿瘤体积明显小于PBS对照组(p<0.01),而HER2/neu-IL12-C.novyi-NT应用组其肿瘤体积又小于C. novyi-NT和pEH1组(Ⅰ,Ⅱ组)(p<0.01)。结论：C.novyi-NT作为实体肿瘤基因治疗载体具有良好的靶向性、安全性,并具有一定的溶瘤作用；HER2/neu-IL12-C.novyi-NT对HER2/neu(?)性小鼠乳腺癌具有良好的治疗作用。