论文部分内容阅读
抗肿瘤药物通常存在半衰期短、易产生耐药性等局限。传统的化疗方法要达到一定的治疗效果往往需要在短时间内频繁给药,导致全身性血药浓度高、毒副作用大,易产生耐药性等问题。本论文针对以上缺陷,根据药物联用能够提高肿瘤治疗效率,利用化学非共价相互作用具有pH敏感性的特点实现药物控制释放,结合现今纳米材料广泛应用于生物医学的研究趋势,选取具有载药量大、易于修饰等特点的氧化石墨烯(GO)纳米颗粒作为基质载体,并采用生物相容性好,具有独特分子识别组装能力,稳定性随p H变化的β-环糊精(β-CD)对其进行改性,制备了一种可实现药物联用的控释体系。目前关于阿霉素(DOX)和拓扑替康(TPT)在联合给药中的药物疗效以及协同作用研究还比较少。本研究对比DOX、TPT单用和二者联用对人宫颈癌细胞(HeLa)增殖的影响,发现DOX和TPT联合应用对HeLa细胞的抑制率均明显高于两药单独使用时的抑制率。通过计算两药联合应用相互作用系数(CDI),发现两药在大部分有疗效的单药浓度联用时均有协同作用,在恰当浓度联用时协同作用极为显著,但若在单药疗效高(24 h抑制率约80%)的浓度时联用,会产生拮抗作用。接下来将研究得到的DOX和TPT联用组合(抑制率>50%的最低剂量配比)引入至GO,具体步骤如下:将通过酰胺反应与金刚烷甲酸(AD-COOH)结合的阿霉素客体分子(AD-DOX)通过主客体反应连接在β-CD上,形成CD/AD-DOX组装分部,然后CD/AD-DOX分部的β-CD与GO之间通过酰胺反应结合,从而将DOX引入GO基质,形成GO-CD/AD-DOX主客体组装载体;其次TPT通过与GO表面的碳环结构发生π-π堆积作用而搭载的主客体组装载体中,最终形成TPT/GO-CD/AD-DOX载药体系。利用傅立叶红外光谱(FT-IR)、紫外可见吸收光谱(UV-vis)、粒径分布、Zeta电位等对样品进行表征;还进行了体外药物释放实验对载药体系(TPT/GO-CD/AD-DOX)的pH响应释放行为进行考察;采用MTT比色法检测细胞存活率,考察GO-CD/AD未载药时的生物相容性;通过细胞摄取实验,考察该双药物控释体系在细胞内的药物释放情况;考察双药物pH敏感释药体系(TPT/GO-CD/AD-DOX)对Hela细胞的杀伤效果。实验结果表明:DOX和TPT均通过相关的作用力成功搭载到GO上,且具有较高的载药率和百纳米级的尺寸大小;TPT/GO-CD/AD-DOX双药物控释体系的释药速率与环境pH密切相关,越是酸性环境,释放速率越快;载药基质(GO-CD/AD)具有良好的生物相容性;TPT/GO-CD/AD-DOX双药物控释体系比DOX、TPT游离药物以及TPT/GO-CD、GO-CD/AD-DOX单药物体系对HeLa细胞的杀伤效果要好。可见,TPT/GO-CD/AD-DOX这种新的抗癌药物递送体系能有效控制两种药物的分步释放,能在微酸性肿瘤病灶部位释放两种药物从而协同抑制肿瘤细胞的生长,提高肿瘤治疗效率。