目的:胃神经内分泌癌是一种罕见的胃恶性肿瘤,具有血管丰富、恶性度高、侵袭性强和容易转移特点,因此临床治疗效果不佳。血管生成与恶性肿瘤进展和转移密切相关,是恶性肿瘤发展的一个重要过程。肿瘤血管靶向治疗可以明显抑制恶性肿瘤的进展,是肿瘤治疗的一种新策略。对肿瘤血管生成机制的研究有助于发现新的治疗靶点。周期素依赖性激酶5激活结合蛋白(CDK5RAP3,即为简称C53/LZAP),在恶性肿瘤组织中的表达差异较大,促癌和抑癌作用均有报道。本课题组前期研究发现CDK5RAP3在胃癌组织中低表达,可通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌进展。但有关CDK5RAP3在胃神经内分泌癌中作用的研究目前尚未见报道。本研究拟探讨CDK5RAP3在胃神经内分泌癌中血管生成中发挥的作用及机制,为胃神经内分泌癌的治疗提供新的候选靶点和干预方法。方法:本研究采用免疫组化检测51例胃神经内分泌癌及癌旁组织中CDK5RAP3的表达情况,并分析其与患者临床病理参数和远期预后的相关性;通过免疫组化检测51例胃神经内分泌癌组织切片CD31(血管内皮标记物)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor,VEGFA)的表达,评估微血管密度和VEGFA的表达情况;通过慢病毒感染胃神经内分泌癌细胞构建过表达及沉默CDK5RAP3的稳转细胞株;通过人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的划痕实验、迁移实验、体外成管实验探讨过表达及沉默CDK5RAP3的神经内分泌癌细胞对血管内皮细胞的运动及成管能力的影响;通过裸鼠皮下成瘤实验及皮下成瘤组织免疫组化实验检测CDK5RAP3在体内实验中对肿瘤生长及血管生成的影响。通过Western Blot、Real-time PCR(RT-PCR)、ELISA实验、细胞免疫荧光探讨CDK5RAP3影响血管生成的机制。结果:1.患者组织切片的免疫组化结果显示CDK5RAP3在胃神经内分泌癌组织中表达比癌旁组织明显降低(p<0.05);相关因素分析显示CDK5RAP3的表达与T分期、N分期、TNM分期密切相关;生存预后分析发现CDK5RAP3低表达的胃神经内分泌癌患者预后更差,且与肿瘤微血管密度密切相关(p<0.05)。2.体外细胞功能实验结果显示在胃神经内分泌癌细胞中CDK5RAP3过表达间接抑制血管内皮细胞迁移运动和体外成管能力。3.WB、PCR、ELISA实验结果显示CDK5RAP3下调AKT/HIF-1α/VEGFA信号通路,降低VEGFA的蛋白合成和分泌。4.裸鼠皮下成瘤实验发现CDK5RAP3抑制皮下肿瘤的生长和肿瘤血管生成。5.胃神经内分泌癌患者组织免疫组化结果分析发现CDK5RAP3表达与VEGFA的表达呈负相关;生存预后分析显示CDK5RAP3低表达且VEGFA高表达的患者预后最差,CDK5RAP3高表达且VEGFA低表达的患者预后最好。结论:在胃神经内分泌癌中CDK5RAP3可以下调AKT/HIF-1α/VEGFA信号通路,减少VEGFA的合成和分泌,抑制胃神经内分泌癌的血管生成;CDK5RAP3与VEGFA联合分析可更准确评估患者预后,靶向CDK5RAP3与VEGFA信号传导有望成为胃神经内分泌癌新的治疗策略。