猪繁殖与呼吸综合征病毒GP3蛋白结合肽的筛选与鉴定

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GP3蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒的次要结构蛋白之一,是由ORF3基因编码的一种高度糖基化糖蛋白,在病毒粒子中含量较少,研究的也不是很透彻,欧洲型与美洲型之间存在较大差异,但同型的不同毒株的GP3基因相似率较高。GP3可以诱导机体产生中和抗体,且不会引起抗体依赖性增强反应,GP3不仅是病毒粒子囊膜的组成部分,而且在病毒粒子被细胞受体识别的过程中,以及病毒变异等方面具有重要意义。鉴于此,本研究首先原核表达了PRRSV ORF3基因编码的GP3蛋白,并利用该蛋白制备了多克隆抗血清;同时,利用噬菌体展示技术,以原核表达的GP3重组蛋白为靶分子,对其进行了四轮生物筛选。从第四轮洗脱物中随机选出10个噬菌体蓝斑,扩增后提取其核苷酸序列进行测序并进行多肽序列推导。结果显示:经过对靶分子的四轮筛选后,最终筛选出一个结合率最高的十二肽,序列为SVSVGMKPSPRP,将其命名为S肽,并将其进行人工合成。进一步通过ELISA证实人工合成的S肽能与GST-GP3重组蛋白结合;各种体外抗病毒试验均表明所筛选出的多肽具有良好的生物活性,可以在体外细胞实验中产生明显的对病毒的抑制效果,且随着多肽浓度的不断提高,抑制效果也提高。综上所述,本研究为特异性鉴别PRRSV,以及鉴定GP3的功能性受体提供了一定参考,并为今后对于PRRS的小分子制剂的开发以及防治提供了一定的理论基础和试验依据。
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