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生物毒素(biological toxins)是生物体分泌的有毒代谢化学物，包括动物、植物、海洋生物和微生物等产生的对其它生物物种有毒害作用的各种化学物质。微生物污染食品，在适宜的条件下产生毒素，这些毒素伴随着食物被人们食用后引起的一系列急慢性中毒称为微生物毒素性食物中毒。微生物食物中毒常见多发，以真菌和细菌毒素污染最普遍。 黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)是自然界中已发现的毒性最强的真菌毒素，主要是由黄曲霉(Aspergillus flavus)、特曲霉(Aspergillus nomius)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)等产生的次生代谢产物。黄曲霉毒素及其衍生物有20多种，其中常见的黄曲霉毒素分别是B1、B2、G1、G2、M1、M2，毒性大小排列顺序为B1＞B2＞G1＞M1＞G2＞ M2[7-8]。黄曲霉毒素B1的毒性最大，致癌力最强。黄曲霉毒素的检测方法包括薄层色谱法、高效液相色谱法、酶联免疫吸附法、胶体金检测技术等，其中酶联免疫吸附测定法具有特异、灵敏、简单、经济、耗时短等优点。 金黄色葡萄球菌肠毒素(Staphylococcal enterotoxins，SEs)是由金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）分泌的外毒素，常引发食物中毒。目前已经发现的SEs大约有20种，其中SEA和SEB研究较多，对于有三个亚型的SEC研究较少。金葡菌肠毒素的检测方法主要有动物试验鉴定法、免疫学方法和针对毒素编码基因的分子生物学方法。其中，肠毒素检测多采用免疫学检测方法。 本研究旨在(1)制备高亲和力和特异性的AFB1单克隆抗体，建立AFB1间接竞争ELISA检测方法，并试用于实际样品检测;(2)制备高亲和力和特异性的SEC单克隆抗体和多克隆抗体，并建立SEC的ELISA检测方法。 1.利用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1完全抗原AFB1-BSA，经紫外分析和ELISA鉴定偶联成功，蛋白浓度为2.5mg/mL，测定其偶联比为8.4∶1～9.3∶1，获得了具有较好偶联比的完全抗原。 2.通过免疫动物、细胞融合、克隆化筛选等技术获得了4株AFB1单克隆抗体，分别为1D6、2D9、3B9、1H4，测定效价均可达1∶204800。腹水纯化效果良好，测定腹水得率最高的3B9的抗体亚类为IgG1，亲和力常数为2.2×109L/mol。 3.利用3B9细胞株分泌的单抗建立了AFB1间接竞争ELISA检测方法，检测线性范围为1.04～25ng/mL，检测限为1.04ng/mL，半数抑制率(IC50)为6.03ng/mL，批内和批间变异系数均小于10％，平均加标回收率在线性范围内可达85％～120％，变异系数均小于10％。通过饲料样品检测证实，该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好，可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检，并为黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒的研制奠定了基础。 4.利用原核表达技术获得了重组蛋白SEC，免疫Balb/c小鼠和新西兰大白兔后获得了SEC单克隆抗体和多克隆抗体。6株SEC单克隆抗体分别为2B10、2C10、4G9、2E7、3B11、2C12，腹水效价可达1∶204800。多克隆抗体的效价可达1∶102400。测定6株单抗的相对亲和力大小为2C12＞2C10＞3B11＞2E7＞4G9＞2B10，其中2C12的亲和力常数为3.19×109L/mol，2B10的亲和力常数为5.74×108L/mol。测定亲和力最佳的2C12的抗体亚类为IgG2a。 5.分别利用SEC单克隆抗体和多克隆抗体建立SEC间接ELISA检测方法，其中利用SEC单抗获得的检测线性范围为62.5-1000ng/mL，检测下限为52ng/mL，利用SEC多抗获得的检测线性范围为250-8000ng/mL，检测下限为158ng/mL。该结果为进一步研究SEC的免疫检测方法提供了基础。