香附醇提物中具有解热镇痛作用的质物质基础研究

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目的:发热、疼痛是人类常见的疾病症状,而常用的解热镇痛药具有不同程度的不良反应,如胃肠道不适、肝肾脏损伤等,因此开发副作用少的解热、镇痛药物是研究人员的热点之一。本实验通过对香附的研究,探寻香附中发挥解热镇痛作用的有效成分,为解热、镇痛药物的开发提供物质基础及数据支持。方法:根据本课题组前期的研究和相关文献的调研发现,香附的乙醇提取物可能具有解热镇痛的作用。因而在此基础上,本实验为寻找香附中发挥解热镇痛作用的有效成分,进行了如下探讨:1.香附药材的鉴定根据《中国药典》2010年版第一部中香附的相关内容,分别从性状鉴别和理化鉴别两方面对其来源、品种进行鉴定。2.香附醇提物的系统提取与解热镇痛的药效学试验对香附进行乙醇的提取,然后用不同的溶剂进行系统萃取,得到不同的部位。再采用大鼠酵母致热法、小鼠扭体法和热板法,观察香附醇提物以不同溶剂萃取所得到的部位在解热、镇痛方面的药效学作用。确定香附中具有解热镇痛作用的有效部位。3.香附石油醚部位的有效物质筛选经过香附中发挥解热镇痛作用的部位筛选确定有效部位后,采用硅胶柱层析、凝胶柱层析、薄层制备、重结晶等方法,辅以TLC、HPLC分析,分离得到不同的化合物。并通过内毒素致家兔发热、小鼠醋酸扭体法、热刺激三种模型,筛选出香附中具有解热镇痛作用的有效成分对有效部位中的成分进行分离纯化。并对得到的化合物利用核磁共振等手段进行结构解析。4有效成分的提取分离研究根据解热、镇痛药效学试验,筛选出的有效成分,通过硅胶柱层析研究,建立有效成分的实验室提取分离工艺。结果:1.通过与《中国药典》2010版比较,确定所用的香附为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L的干燥根茎。2.经药效学试验表明,香附醇提物的石油醚萃取部位对酵母引起的大鼠发热有显著的解热作用(P<0.05);对热板所致的小鼠疼痛和醋酸所致的小鼠扭体反应均有抑制作用(P<0.05)。3.利用硅胶柱层析、薄层制备等手段,从香附中分离得到4个化合物。根据解热、镇痛的三种动物模型,发现香附中发挥解热镇痛作用的有效成分为α-香附酮。4.通过对α-香附酮的提取分离研究,确定α-香附酮以95%的乙醇提取3次,每次2h,过滤,浓缩得到浸膏。将浸膏用石油醚萃取,再用硅胶柱层析,以石油醚:乙酸乙酯(100:1→8:1)梯度洗脱,每个馏分收集三个柱体积,其中α-香附酮在石油醚:乙酸乙酯(20:1)的馏分中洗脱得到。结论:本实验通过对香附醇提取以不同的溶剂萃取,结合解热、镇痛的三种动物模型,筛选出有效部位石油醚萃取层。通过硅胶柱色谱等分离手段,对有效部位进行分离、纯化,得到化合物1-4。再对经分离得到的化合物进行药效学实验,发现香附中发挥解热镇痛作用的有效成分为α-香附酮。通过对α-香附酮分离纯化的试验,确定a-香附酮的提取工艺为以95%7,醇提取,用石油醚萃取,经硅胶柱层析,以石油醚:乙酸乙酯梯度洗脱分离即可。
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