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背景目的:胰腺癌是一种恶性水平很高,诊断和医治都很困难的消化道肿瘤,其发病率和死亡率呈逐年回升趋向。主要原因在于胰腺癌早期症状不明显,缺乏灵敏性高特异性强的早期诊断手段,恶性程度高,手术切除率低,特别是侵袭转移强是胰腺癌高死亡率的重要影响因素。EMT征象的主要特性是上皮细胞表型的丢失与间质特性的获得,并且EMT是肿瘤发生发展过程中的重要现象,不只有助于癌症细胞的早期传播,更是恶性肿瘤细胞取得迁移和侵袭能力的重要生物学过程,是细胞维持干性的重要因素。小Ras同源蛋白ARHI在胰腺癌中具有周期阻滞及抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡与自噬的作用,但其在胰腺癌上皮间质转化及转移侵袭中的功能与机制尚不明确。本实验旨在研究ARHI表达与胰腺癌细胞EMT及细胞干性标志蛋白表达相关性,并探讨ARHI介导EMT与细胞干性的功能与分子机制。方法:首先通过免疫组化检测ARHI在不同进展的胰腺癌中,以及在转移与非转移性胰腺癌中的差异表达;其次,在不同分化程度的胰腺癌细胞中通过蛋白免疫印迹检测ARHI与EMT蛋白表达水平的相关性,并改变内源性ARHI表达后从蛋白和m RNA水平探讨了细胞EMT标志蛋白表达的变化;再次,通过Transwell检测细胞迁移能力、扫描电镜检测伪足与绒毛形成、以及共聚焦检测细胞干性微球体形成能力,明确ARHI在胰腺癌细胞EMT与侵袭相关生物学行为中的作用。同时对裸鼠进行脾脏注射构建肝转移模型,进一步验证ARHI对体内胰腺癌细胞迁移侵袭的影响。最后,应用ERK信号通路抑制剂U0126处理后,通过蛋白免疫印迹检测ERK磷酸化、EMT及细胞干性水平。结果:ARHI表达与胰腺癌细胞恶性度正相关,与胰腺癌细胞EMT及细胞干性水平正相关。在体内外相关生物学功能研究,发现ARHI促进胰腺癌细胞EMT相关表型,如促进细胞微绒毛及伪足形成,促进微球体形成及侵袭迁移;信号通路筛选实验显示下调内源ARHI表达后ERK磷酸化明显上调;应用抑制剂后,大多数EMT标志蛋白表达被拮抗,然而Notch-1蛋白水平仍随ARHI表达下调而下调;结论:我们研究证明ARHI对胰腺癌细胞EMT及细胞干性的促进效应并不完全依赖ERK通路,还与关键蛋白Notch-1的表达密切相关。