柚苷酶是一种重要的生物酶制剂,在生物食品行业有着非常广泛的应用。为了进一步提高柚苷酶发酵酶活,本文采用超声处理策略对黑曲霉发酵产柚苷酶过程进行研究,在单因素实验基础上,通过响应曲面法对超声处理工艺进行优化,并进一步通过RT-PCR技术对超声处理强化黑曲霉发酵产柚苷酶酶活的分子机理进行研究。在单因素实验的基础上,以超声刺激的时机,超声刺激功率、超声刺激时长,超声刺激次数和超声刺激间隔时长为因变量,以柚苷酶酶活力为响应值,进行五因素三水平的Box-Behnken实验设计,通过响应曲面法优化超声刺激工艺。最终得到最佳超声刺激工艺条件为:超声刺激时期27 h,超声刺激功率160 W,超声刺激时长14 min,超声刺激次数2次,超声刺激时间间隔13 h,此时柚苷酶酶活可达1059.20 U/mL,与未进行超声刺激处理的对照组相比酶活力提高了23.16%。进一步提取经过超声处理的黑曲霉α-L-鼠李糖苷酶(RHA)基因,通过RT-PCR技术与对照组的RHA基因表达量进行对比,发现经过多次超声处理后RHA基因的表达量均发生变化,在处理两次时表达量达到最高,并且超声刺激对柚苷酶酶活力的影响变化与RHA的变化规律相同,说明超声刺激通过影响RHA的表达量进而影响黑曲霉发酵产柚苷酶酶活。本研究对超声刺激影响黑曲霉产柚苷酶的相关基因表达情况进行了初步探索,为深入研究新型柚苷酶发酵策略,促进其在食品加工及生物催化研究领域的产业化发展提供基础数据和技术支持。