论文部分内容阅读
目的：采用枕大池内注入脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)的方法建立兔颅高压动物模型，观察脑组织病理形态学改变，脑组织含水量(brainwatercontent，BWC)、血脑屏障(bloodbrainbarrier,BBB)通透性、水通道蛋白-1(aquaporin-1，AQP1)、水通道蛋白-4(aquaporin-4，AQP4)及P-选择素(P-selectin)表达水平的动态变化，研究水通道蛋白及选择素家族在颅高压状态下与脑水肿形成的关系，及其可能的作用机制，为临床颅高压的治疗提供理论依据。
方法：健康日本长耳白兔，随机分为正常对照组、生理盐水组、模型组和甘露醇组，后三组的观察时间点选定于造模后3h、6h、12h、24h、48h。采用经皮穿刺枕大池内注入脂多糖的方法制备颅高压动物模型。正常对照组、生理盐水组及模型组在造模前及造模后相应观察时间点进行枕大池穿刺直接测量颅内压(intracranialpressure，ICP)。测定脑组织含水量、伊文思蓝(Evansblue，EB)含量的动态变化。通过HE染色法观察脑组织的病理形态学变化。应用免疫组化方法检测AQP1、AQP4及P-选择素蛋白水平的表达变化。应用Westernblot方法检测AQP1蛋白水平的表达变化。应用RT-PCR技术测定脑组织内AQP4mRNA的表达。
结果：生理盐水组颅内压比较稳定，与正常对照组比较无显著性差异；模型组在注入LPS后颅内压逐渐增加，在6～12h内达高峰，颅内压超过初始压力1倍以上。生理盐水组脑组织含水量及EB含量比较稳定，各时间点与正常对照组比较无显著性差异；模型组各时间点脑组织含水量及EB含量较生理盐水组显著增高，均在6h达高峰；甘露醇组各时间点脑组织含水量及EB含量低于模型组，而高于生理盐水组，与这两组比较均存在显著性差异。光学显微镜下观察各组病理变化，生理盐水组未见明显的病理性损伤，偶见皮层神经元固缩；模型组可见3h时间点脑组织内神经元出现固缩，血管周围腔隙增宽，血管周围可见炎性细胞浸润，6～12h神经元固缩明显增多，血管周围腔隙明显增宽，组织间隙可见大量水肿液，血管周围大量炎性细胞浸润，以淋巴细胞为主，可见小胶质细胞增生，24～48h血管周围腔隙增宽减轻，组织间隙仍有较多的水肿液，神经细胞水肿，核仁消失，核染色质边集，胶质细胞和内皮细胞肿胀明显；甘露醇组上述病变较轻，病变高峰期延迟到12h出现。生理盐水组与正常对照组各时间点脑组织中有少量AQP1蛋白表达，之间无显著性差异；模型组AQP1蛋白的表达水平随时间逐渐增高，6h达高峰，显著高于生理盐水组；甘露醇组在造模3h表达开始增高，各时间点与生理盐水组比较有显著性差异，但显著低于模型组。生理盐水组各时间点脑组织中有少量AQP4蛋白及mRNA表达，与正常对照组之间无显著性差异；模型组在造模3hAQP4蛋白及mRNA表达开始增加，显著高于生理盐水组，至6h达高峰，此后明显下降，24～48h显著低于生理盐水组；甘露醇组造模后3hAQP4mRNA表达也开始增加，在6h达高峰，3～6h表达明显高于生理盐水组，但低于模型组；随后表达开始减弱，24～48h表达显著低于生理盐水组，但与模型组比较无显著性差异。正常对照组及生理盐水组脑组织中未见P-选择素表达；模型组在造模3h，P-选择素蛋白表达开始增加，至12h达高峰，随后表达逐渐降低；甘露醇组在造模后表达增高，在12h达高峰，随后表达减少，各时间点显著低于模型组。
结论：兔枕大池内注入LPS可以建立颅高压动物模型，脑组织含水量和血脑屏障通透性增加，病理学特点是血管源性脑水肿出现早且持久，后期伴有细胞毒性脑水肿的改变。水通道蛋白-1表达增强，与脑水肿的形成有关。水通道蛋白-4早期表达增强是胶质细胞的适应性反应，与血脑屏障的破坏有关，促进了血管源性脑水肿的发生。后期AQP4表达减弱是是机体内在防御机制的表现，同时又促进了细胞毒性脑水肿的形成。P-选择素早期表达显著增高，后期明显降低，提示在病变的早期启动炎性反应，参与血脑屏障的破坏和脑水肿的形成。甘露醇可能通过抑制AQP1、AQP4及P-选择素的表达，减轻脑水肿的严重程度，从而起到脑保护的的作用。