降解白酒糟中黄曲霉毒素B1的菌株的筛选及发酵工艺的研究

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黄曲霉毒素B1(AFB1)是一种具有强烈毒性和致癌性的真菌次级代谢物。在合适的气候条件下,可以污染粮油、饲料、香料等,污染范围广,造成很大的经济损失。白酒糟是一种优质的饲料,但储存不当或时间过长都会使其被AFB1污染。目前检测AFB1的方法有很多,其中高效液相色谱法被认为是最为稳定、可信、精密的方法。本文建立了白酒糟中AFB1的高效液相色谱检测方法,并筛选出具有降解AFB1能力的7株菌,将其应用于白酒糟中,并初步探索了发酵条件。主要实验结果如下:确定了AFB1的高效液相色谱检测方法的色谱条件:荧光检测器波长:λex=360 nm,λem=440nm,甲醇-乙腈-水三相作为流动相,三相配比为:甲醇:乙腈:水(v/v)=10:30:60,流速为0.6 mL/min,柱温30℃,进样量为20μL。在此色谱条件下,得到的标准品色谱峰尖锐,峰形对称,响应值较高,分析时间为22min。在10 μg/L到1000μg/L的浓度范围内,线性良好,相关系数达到0.9999。以3倍信噪比计算检测限,为1.0 μg/L。建立了白酒糟中AFB1高效液相色谱检测方法:称取20 g白酒糟粉加入100mL60%的甲醇提取液,加入4gNaCl,摇床震荡提取20min,过滤,调整pH至7,取10 mL滤液加入10 mL蒸馏水稀释,过免疫亲和柱,分别用10mLPBS-T缓冲液和10mL蒸馏水淋洗柱子,最后用1mL甲醇将AFB1洗脱下来,过膜,HPLC检测。加标回收实验证明此方法在加标量高时回收率较高,在80%以上,加标量低时回收率有所下降。筛选到7株具有降解AFB1能力的菌株,降解率都在70%以上,其中4#菌株最高,降解率达到了93.1%。经鉴定7株菌分别是Staphylococcus warneri, Bacillus methylotrophicus, Brevibacterium sp. MN3-3, Bacillus sp. Dca24, Arthrobacter sp. 3MW2b.将降解率在80%以上的4株菌应用于白酒糟中,6#降解率最高。单因素实验表明,该菌株在温度为30℃,pH=7,发酵时间为72 h时对白酒糟中AFB1降解效果较好,降解率达到52.83%。这是首次将微生物降解AFB1的技术应用于白酒糟中,并取得了较好的效果。
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