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禽腺病毒血清4型（Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4）是家禽心包积液-肝炎综合症（Hydropericardium-hepatitis syndrome,HHS）的主要病原体。自2014年以来,我国广东、河南、湖南、湖北、云南等地区的家禽暴发该疾病,给养殖业带来不同程度的损失。该病主要感染3-5周龄鸡、5-10周龄品种鸭和鹅,感染的初期没有明显症状,一周后开始出现精神沉郁,腿软无力,拉白色或淡绿色稀粪等症状,解剖有明显的浅黄色透明的心包积液和肝脏肿大以及出血的现象。本试验建立了套式PCR检测FAdV-4方法,对疑似病例进行检测,从确诊病例中分离病毒,利用分离浓缩的病毒尿囊液制备油乳剂灭活疫苗,进一步制备卵黄抗体。试验主要内容及结果如下:1 FAdV-4套式PCR检测方法的建立与应用为了对疑似感染FAdV-4的病例进行敏感、快速检测,本试验参考GenBank上发表的FAdV-4六邻体（Hexon）基因片段序列设计了2对特异性检测引物,先对反应条件进行优化,之后建立了套式PCR检测FAdV-4的实验室检测方法。应用该方法对FAdV-4标准毒株进行检测,两步PCR扩增片段大小分别为663bp和593bp。对建立的套式PCR方法的敏感性、特异性及扩增片段的核苷酸序列等进行了测定。结果显示,该方法的灵敏度比常规普通的PCR检测方法提高了1000倍,不能扩增鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感、鸭肝炎等病毒,扩增的DNA片段核苷酸序列与报道的FAdV-4序列相似性在99%以上。建立的套式PCR方法,可以从疑似病料中检测FAdV-4,敏感性比FAdV-4通用引物PCR高;能从产蛋鸡、鸭肛拭子中检测病毒。以上结果显示,建立的FAdV-4套式PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于临床病料和动物肛拭子中FAdV-4的检测。2 FAdV-4分离与鉴定将套式PCR检测为阳性的FAdV-4病料处理液经卵黄囊接种7日龄鸡胚,连续盲传5代,收集的尿囊液中检测到约600bp的单一条带,克隆测序获得595bp的核苷酸序列。在Genebank中使用Blast软件比对分析,克隆片段的核苷酸序列与FAdV-4 L160962（MF981081.1）等毒株的相似性在96%以上,且处于同一分支。该分离毒株纯净无细菌及外源病毒污染。经尿囊腔接种,对7日龄鸡胚的半数致死量（ELD50）为10-2.16/0.2ml。经腿部肌肉接种1日龄雏鸭和14日龄雏鹅,部分雏鸭在接种后17天发病死亡,表现突然倒地、抽搐死亡,解剖可见心包内有少量积液,肝脏肿大出血。接种鹅在观察期内无明显异常临症表现,无死亡;接种后不同时间捕杀,剖检可见少量的心包积液,其它器官无明显的大体病变;套式PCR检测心、肝、脾、胰腺组织及肛拭子为FAdV-4阳性;血清谷草转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、谷丙转氨酶（ALT）、乳酸脱氢酶（LDH）等活性在接种后第3dpi和5dpi显著升高。3鸡抗FAdV-4抗体的制备将保存的FAdV-4病毒尿囊液进行浓缩,经过甲醛灭活之后制备油包水乳剂抗原,产蛋鸡分别间隔15天免疫3次,三免后15天收集卵黄制备卵黄抗体。以分离的FAdV-4毒株为检验种毒,采用固定病毒稀释抗体法进行鸡胚中和试验,测定鸡禽FAdV-4卵黄抗体的中和效价。三次测定结果分别为1:380、1:348和1:363,平均值为1:364。