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[目的]目前期研究已经证实IL-27具有抑制肺纤维化形成的作用,本实验拟从ERK/p38通路与自噬的调控角度进一步探讨IL-27在肺纤维化形成中的机制。[方法]60只健康雄性成年C57/BL小鼠(7-8周)给予自由饮食及饮水,常规饲养观察3日后随机分为NC组(正常组)、BLM组(博来霉素),BLMI+IL-27组(博来霉素+白介素27),BLM+RAPA组(博来霉素+雷帕霉素)、BLM+SP600125组(博来霉素+ERK通路抑制剂)及BLM+SB203580组(博来霉素+p38通路抑制剂),每组10只,依据分组给予相应药物干预,饲养28天后处死小鼠。1.NC 组、BLM 组、BLM+IL-27 组及 BLM+RAPA 组,采用 Masson’s 染色法观察肺组织病理结构及变化,RT-PCR法检验COL-I、COL-III胶原表达水平,LC3B-I,LC3B-II和P62自噬相关因子的蛋白质印迹分析,研究IL-27对自噬水平的调控和对肺纤维化的影响。2.NC 组、BLM 组、BLM+IL-27 组、BLM+RAPA 组、BLM+SP600125 组及BLM+SB203580 组,Western blot 法用于检测肺组织 p-ERK、ERK、p-p38、p38表达水平。检测ERK和p38信号通路是否与肺纤维化有关,及IL-27对其起到何种调控作用。3.NC 组、BLM 组、BLM+IL-27 组、BLM+SP600125 组及 BLM+SB203580组,采用Masson’s染色法观察肺组织病理变化,RT-PCR法检验COL-I、COL-III胶原表达水平,Western blot检测LC3B-Ⅰ、LC3B-Ⅱ自噬相关因子,研究IL-27调控ERK/p38通路对自噬及肺纤维化的影响。[结果]1.IL-27对自噬和小鼠肺纤维化的影响:Masson染色结果显示在BLM诱导肺纤维化小鼠肺组织切片中观察到了明显的肺纤维化样改变,肺泡原有结构大量受损,残余肺泡间隔明显增厚,肺组织切片可见多处大面积蓝染胶原沉积及纤维化样改变;IL-27干预组和RAPA干预组肺泡结构基本完整,可见部分胶原沉积,肺纤维化程度较BLM组明显减轻。qRT-PCR检测COL-Ⅰ,Ⅲ结果表明,BLM处理小鼠肺组织中COL-Ⅰ,Ⅲ含量显著升高(P<0.001),IL-27或RAPA作用后相对BLM组COL-Ⅰ,Ⅲ表达降低(P<0.00l)。Western blotting检测结果显示,相比于对照组,BLM处理小鼠肺组织中LC3B-Ⅱ与LC3B-Ⅰ比值明显降低而p62的表达水平明显升高(P<0.001),而经IL-27或RAPA处理之后相对于BLM组LC3B-Ⅱ与LC3B-Ⅰ 比值明显升高,p62的表达水平明显降低(P<0.001)。结果表明BLM诱导肺纤维化形成中自噬受到抑制,IL-27和雷帕霉素能够激活自噬的表达。2.IL-27对ERK/p38信号通路的调控作用:Western blotting检测结果显示,相比于对照组,BLM处理后p-ERK与ERK 比值和p-p38与p38比值明显升高(P<0.001)。ERK通路抑制剂(SP600125)或p38通路抑制剂(SB203580)与BLM共同作用于小鼠后,相对于BLM组p38和ERK磷酸化水平明显降低(P<0.001)。加入IL-27或RAPA干预后相对于BLM组p38和ERK磷酸化水平明显降低(P<0.001)。3.IL-27调控ERK/p38通路对自噬及肺纤维化的影响:Masson结果显示:IL-27干预组肺泡结构基本完整,可见部分胶原沉积,肺纤维化程度较BLM组明显减轻,ERK通路抑制剂(SP600125)组或p38通路抑制剂(SB203580)组肺泡结构基本保留,肺纤维化程度较BLM组减轻。qRT-PCR检测结果证实IL-27或ERK/p38通路抑制剂处理组相对BLM组COL-Ⅰ,Ⅲ表达降低(P<0.001)。Western blotting结果显示,相比于BLM处理组,IL-27或ERK/p38通路抑制剂处理小鼠后LC3B-Ⅱ与LC3B-Ⅰ比值明显升高(P<0.001)。[结论]1、IL-27可明显上调自噬水平并抑制BLM诱导的肺纤维化。2、IL-27可以抑制BLM诱导的肺纤维化中ERK/p38信号通路的激活。3、IL-27可能通过下调ERK/p38信号通路上调自噬水平,并缓解BLM诱导的肺纤维化进程。