青鱼IRF5基因的克隆及功能初探

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青鱼是我国重要的淡水经济鱼类,但是自然和养殖环境的多种病原微生物对青鱼的养殖构成了严重威胁。本研究以青鱼IRF5(Black carp interferon regulated factor 5,bcIRF5)为研究对象,探究了bcIRF5在宿主及宿主细胞抗病毒先天性免疫过程中发挥的作用。本研究克隆了青鱼IRF5基因,并对青鱼IRF5基因进行了重组表达及功能分析,取得了如下结果:1.与其他动物的IRF5同源物相比,青鱼IRF5在序列和结构上具有高度的保守性,其氨基酸序列与同为鲤科鱼类的草鱼和斑马鱼IRF5的氨基酸序列具有极高的相似性,分别为99.6%和93.6%;而其两个重要结构域DNA结合区域(DNA banding domain,DBD)和IRF相关结构域(Interferon association domain,IAD)则极为保守;2.实时荧光定量PCR显示SVCV和GCRV能影响bcIRF5在不同组织中的表达,同时发现两种模拟刺激物(Poly(I:C)与LPS)和SVCV与GCRV这两种病毒也在宿主细胞MPK中影响bcIRF5的mRNA表达水平;3.蛋白质免疫印迹显示在EPC或HEK293T细胞中重组载体表达的bcIRF5大小均为65 kDa;4.bc IRF5在EPC细胞和MPK细胞中,主要定位于细胞质,同时也发现其具有较弱的干扰素调节能力;5.bcIRF5能与bcTBK1相互作用并抑制TBK1介导的bcIFNa的启动子活性。然而当这两个因子共转时,却又能抑制GCRV的复制。我们发现当在EPC细胞中共转bcIRF5与bcTBK1并加以GCRV刺激时,细胞的存活率较之二者分别单转都有较大的降低。因此我们认为bcIRF5与bcTBK1相互作用诱导已感染细胞死亡,由此而抑制病毒的复制。总之,我们的数据表明,bcIRF5参与了青鱼抗病毒先天性免疫反应,它与bcTBK1相互作用一方面降低bcTBK1激活的干扰素启动子活性,这或许与抑制过免疫的发生有关;另一方面在先天性免疫反应中,二者通过诱导细胞死亡从而抑制病毒复制。
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