在普通荧光分光光度计上操作的光散射法的定位讨论及其分析应用

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在普通荧光分光光度计上进行光散射测定是研究生物大分子聚集的强有力的方法。但目前对这种光散射法的类型的定义很不一致。本文对此进行了分析讨论并对我们的实验方法进行了新的定位。同时我们也对无机金属离子诱导蛋白质的聚集进行了研究。本文的研究内容主要包括以下几个方面: 1.在普通荧光分光光度计上操作的光散射法的定位讨论 对在普通荧光分光光度计上操作的光散射法的光散射类型进行了分析讨论。对当前文献中所报道的关于瑞利散射、共振瑞利散射、共振光散射以及光散射这四种光散射类型进行了区分。我们认为,不同的散射有其不同的适用范围,瑞利散射是小颗粒的光散射特征,共振光散射需满足对光的吸收再散射条件,而共振瑞利散射是两个条件都满足的情况。根据四种光散射类型的不同的特征,对当前的文献进行了新的定位。 2.金属离子诱导蛋白质聚集的光散射研究 利用光散射法研究了Fe(Ⅲ)诱导蛋白质聚集的各种影响因素以及诱导蛋白质聚集的机理。结果表明溶液的酸度、阴离子的共存、温度等均对Fe(Ⅲ)诱导蛋白质的聚集作用有一定影响。而对加入Fe(Ⅲ)前后蛋白质的吸收光谱、内源荧光的表征则表明Fe(Ⅲ)是通过改变蛋白质的构象而最终诱导蛋白质的聚集。 研究了不同价态金属离子对蛋白质的诱导聚集作用。研究发现,高价态金属离子普遍比低价态金属离子更容易诱导蛋白质的聚集。根据散射强度与金属离子浓度的关系,计算了不同金属离子诱导蛋白质聚集的临界聚集浓度(criticalinduced-aggregation concentrations,C<,CLAC>)。 以Al(Ⅲ)为例详细研究了金属离子本底溶液的光散射现象,研究表明,在进行光散射测定时,扣除本底溶液的光散射强度非常重要。
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