分娩启动中NF-κB与AP-1易位及NMB对其的影响

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目的:1、探讨NMB介导的NF-κB及AP-1的表达量变化和相关性与分娩启动的关系。2、研究子宫下段平滑肌细胞中NMB介导的NF-κB及AP-1发生细胞内易位与分娩启动的关系。方法:1、组织块贴壁法原代培养人妊娠晚期子宫下段平滑肌细胞,采用免疫细胞化学方法进行鉴定。2、临产前后子宫下段平滑肌组织采用石蜡包埋固定,采用苏木精-伊红染色方法进行切片质量检测。3、采用免疫组织化学方法对自然临产前后子宫下段平滑肌细胞中NF-κB及AP-1表达进行测定。4、采用免疫细胞荧光对NMB诱导前后子宫下段平滑肌细胞中NF-κB(p65)及AP-1(c-Jun)表达进行测定,并通过多重免疫荧光染色进行NF-κB及AP-1的细胞内共定位。5、采用Image-Pro Plus6.0软件进行NF-κB及AP-1表达的累积光密度值(IOD)测定,采用SPSS19.0软件分析NF-κB及AP-1表达的差异及相关性。结果:1、组织块贴壁法培养的原代子宫平滑肌细胞生长状态良好,经免疫细胞化学法α-SMA鉴定及NMBR检测,细胞纯度近100%,说明培养的细胞是表达NMBR的子宫平滑肌细胞。2、组织经石蜡包埋固定,行HE染色检测。子宫下段平滑肌细胞结构清晰,说明组织固定包埋方法可行,组织切片适于进行免疫组织化学染色检测。3、自然临产前后子宫下段平滑肌细胞中p65、c-Jun定位:未临产组p65与c-Jun主要位于细胞浆,临产组p65与c-Jun主要位于细胞核。并且临产组与未临产组p65、c-Jun表达量存在差异,临产组p65及c-Jun表达量高于未临产组,差异具有统计学意义,P<0.05。4、自然临产前后子宫平滑肌细胞中p65与c-Jun表达量Pearson相关性分析:未临产组及临床组的p65及c-Jun表达均存在正相关,相关系数分别为0.659、0.879,p<0.05。5、NMB诱导前后p65、c-Jun定位:未加NMB的对照组位于细胞浆;NMB4h组主要位于核膜周边区域;NMB8h组主要位于细胞核,细胞浆呈低表达。6、NMB诱导前后的p65、c-Jun表达:NMB8h组IOD值明显高于对照组及NMB4h组,差异具有统计学意义,P<0.05;NMB4h组与对照组之间差异无统计学意义,p>0.05。7、p65与c-Jun共定位:对照组、NMB4h组、NMB8h组,多重免疫荧光染色显示二者在细胞内表达部位一致,NMB诱导前二者主要位于细胞浆,NMB诱导后8小时二者主要位于细胞核,表达部位几乎完全重叠。8、NMB诱导的p65与c-Jun表达量Pearson相关性分析:对照组、NMB4h组、NMB8h组中,p65与c-Jun均呈正相关,相关系数分别为0.587、0.653、0.874,P<0.05。结论:1.分娩启动前,NF-κB及AP-1定位于细胞浆,分娩启动后NF-κB及AP-1迁移进入细胞核。2.NMB可同时诱导NF-κB及AP-1易位,二者定位及迁移方向呈同步变化,表达量同时增高,推测NF-κB与AP-1可能存在协同作用。
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