论文部分内容阅读
急性肺损伤(ALI)包括急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是由于各种直接或间接损伤导致的肺部炎症反应.乌司他丁是一种存在于人尿中的蛋白酶抑制剂,证实通过其抗炎症作用可以改善脓毒症休克相关的器官功能衰竭和保护缺血再灌注导致的肝、肾、肺损伤.我们采用内毒素诱导大鼠急性肺损伤模型研究乌司他丁的保护作用;并通过体外试验观察乌司他丁对激活人单核细胞、中性粒细胞产生TNF-α、IL-1 β和其他炎症介质的影响.在体试验,成年Wistar大鼠随机分配成下列各组(每组12只):在量效关系研究中,模型组(model)尾静脉注射6mg/ml的脂多糖;低剂量组(L-UTI组)在注射脂多糖后立即注射25,000U/kg剂量的乌司他丁;中剂量组(M-UTI组)在注射脂多糖后立即注射50,000U/kg剂量的乌司他丁;高剂量组(H-UTI组)在注射脂多糖后立即注射100,000U/kg剂量的乌司他丁;假损伤组(sham-lesion组)仅注射0.9％生理盐水代替脂多糖和乌司他丁;在给药时间对保护效果研究中,附加两个给药组:H1-UTI组在注射脂多糖30分钟前注射100,000U/kg剂量的乌司他丁,H2-UTI组在注射脂多糖后30分钟注射100,000U/kg乌司他丁,各组动物在注射脂多糖后6小时处死,分别测定肺组织髓过氧化物酶活性、肺湿重一干重比和肺灌洗液蛋白浓度、出血和中性粒细胞弹性蛋白酶活性,以及肺组织病理学检查.体外试验,在不同浓度乌司他丁条件下用脂多糖刺激人单核细胞,用ELISA试剂盒测定TNF-α、IL-1β的产生.在不同浓度乌司他丁存在的条件下,用合成发色底物S-2484测定N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(fMLP)刺激人中性粒细胞释放弹性蛋白酶,用化学发光分析测定调理酵母多糖刺激人中性粒细胞产生自由氧基.静脉注射6mg/kg脂多糖诱导急性肺损伤表现为严重的肺水肿伴肺组织大量中性粒细胞聚集,肺灌洗液蛋白浓度、中性粒细胞弹性蛋白酶活性增加.乌司他丁剂量依赖性减少肺损伤,与模型组比较50,000U/kg乌司他丁显著抑制肺组织髓过氧化物酶活性、肺湿重一干重比、肺灌洗液蛋白浓度和中性粒细胞弹性蛋白酶活性增加(p<0.05).光学显微镜检查肺组织切片,100,000U/kg乌司他丁可有效抑制肺损伤的进展.在相同剂量(100,000U/kg)条件下,预防给药更有效.体外实验,乌司他丁以浓度依赖方式抑制fMLP刺激中性粒细胞释放弹性蛋白酶和调理酵母多糖刺激中性粒细胞产生氧自由基;乌司他丁也以浓度依赖方式抑制内毒素刺激单核细胞产生TNF-α和IL-1 β.