方剂由药物所组成,涉及到药味、用量、剂型、服法等要素；方证指特定方剂所适应或主治的病证,通常涉及到病机及症征等要素；方剂效用是指特定方剂作用于适应病证所呈现出的治疗效应。在中医方药体系中,药-方-证-效之间的内在统一不仅是学科立论的重要学术逻辑,也是临证辨证论治的经验基础。根据中医“方证关联”的原理,方剂的效应不仅与其制方要素有关,还与其所作用的对象状态或病证有密切的关系。本课题以“方-证关联”为学术背景,以补中益气汤益气除热功用为切入点,在成功复制出脾虚发热大鼠模型的基础上,比较观察了补中益气汤及其不同配伍作用于脾虚发热证大鼠模型的干预效应,从实验的角度论证补中益气汤的组方合理性及探讨中医方药与病证之间的关联性。研究一脾虚发热动物模型的复制方法：雄性wistar大鼠,200-220g,40只。大鼠随机分为正常对照组、单纯发热组、单纯脾虚组、脾虚发热模型组,共4组,每组10只。脾虚发热模型组和单纯脾虚组每日下午2：00置于盛有温水(22℃±1)的塑料钢化桶中游泳10min；隔日喂食(隔日禁食,隔日足量给食),连续3w。每周测体重1次,测量体温1次,并观察其外观行为变化。第21d各组大鼠灌服10%D-木糖溶液5mL,于代谢笼中收集大鼠5h的尿液,待测D-木糖排泄率。于造模第22天的上午8：00,脾虚发热模型组大鼠和单纯发热组大鼠腹腔注射LPS (80μg/kg),诱发动物发热；正常对照组和脾虚模型组注射等量生理盐水。分别于注射30min、60min、120min、180min、240min、330min测肛温,绘制各组平均体温曲线。随后即刻腹腔注射10%水合氯醛(0.35ml/100g体重)麻醉,腹主动脉取血6ml,其中3mL室温放置,2500rpm离心15min,取血清,冰箱-20℃保存,待测GAS、IL-1β、IL-2、IL-6、T3、T4、TSH;另3mL于管中预置的10%EDTA·Na230μL和抑肽酶40μL,充分混匀,2000rpm离心10min,取血浆,于-20℃保存,待测MTL、SS。结果：1)与正常对照组比较,单纯发热组大鼠体温显著升高,在60min、120min、180min、240min、330min时的差异均具有非常显著或显著性意义(P<0.01或P<0.05)；脾虚发热模型组大鼠体温在30min时有一过性降低,之后体温显著升高,其中在60min、120min、180min、240min时的差异均具有非常显著或显著性意义(P<0.01或P<0.05)；单纯脾虚组大鼠的体温在60min时有一过性升高,差异具有非常显著性意义(P<0.01),之后体温变化不大。与单纯发热组相比,脾虚发热模型组大鼠体温较低,体温曲线一直位于其下方,在30min、60min、120min、330min时差异具有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)；单纯脾虚组大鼠除60min有一过性升高外,各点体温均降低,差异均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<O.01)。与单纯脾虚组相比,脾虚发热模型组大鼠体温在30min时有一过性降低,之后体温显著性升高,在120min、180min、240min时的差异均有非常显著性意义(P<0.01)。2)实验期间,正常对照组大鼠和单纯发热组大鼠体重明显增加。与正常对照组比较,脾虚发热模型组与单纯脾虚组大鼠在第1w、2w、3w末的体重均明显降低,差异有显著或非常显著性意义(P<0.05或P(0.01)；单纯发热组大鼠体重变化不大。与单纯发热组相比,脾虚发热模型组与单纯脾虚组大鼠在第1w、2w、3w末的体重均明显降低,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。与单纯脾虚组相比,脾虚发热模型组大鼠体重变化的差异无显著性意义(P>0.05)。造模1周后,正常对照组和其他三组大鼠的行为状态、活跃程度、情绪反应、皮肤毛发、饮食、睡眠与大便状态等均未有明显变化,外观行为各指标变化积分值差异均无显著性意义(P>0.05)。实验第2周,单纯脾虚组和脾虚发热组大鼠开始表现出活动减少、喜扎堆、饮食减少、皮毛不顺、便溏等；第3周出现动作迟缓、神情倦怠、饮食减少、毛发不泽、倦卧、便溏等变化。较之正常对照组,此二组大鼠的外观行为各指标变化积分值均见明显升高,差异均有非常显著性意义(P<0.01)；单纯发热组大鼠的外观行为各指标变化积分值的差异无显著性意义(P>0.05)。与正常对照组和单纯发热组相比,单纯脾虚组和脾虚发热模型组大鼠尿D-木糖排泄率降低,外周血GAS、MTL含量均明显降低,SS含量升高；血IL-1β、IL-2含量降低,血IL-6含量升高；T3、T4、TSH含量均见降低,差异均有显著后非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)；与正常对照组相比,单纯发热组大鼠上述各指标均未见明显变化,差异均无显著性意义(P>0.05)。与单纯发热组相比,单纯脾虚组和脾虚发热模型组大鼠D-木糖排泄率均见降低,差异均有显著性意义(P<0.05)。与单纯脾虚组相比,脾虚发热模型组大鼠外周血T4含量明显降低(P<0.01),其余各项指标的差异均无显著性意义(P>0.05)。结论：采用饮食失节+过度疲劳+LPS注射的复合方法可引起大鼠在外观表征、体重和体温方面呈现类似中医脾虚发热见症,且其伴有外周血免疫相关介质、胃肠激素、物质代谢相关激素的类近中医脾气虚证的病理生理变化,结果表明该模型符合中医气(脾)虚发热证。研究二补中益气汤不同配伍对脾虚发热动物模型的影响方法：雄性wistar大鼠,200-220g,60只。大鼠随机分为正常对照组、脾虚发热模型组、补中益气汤原方组(即补中益气汤小剂柴升组)、补中益气汤去柴升组、补中益气汤大剂柴升麻组、大剂柴胡+升麻组共6组,每组10只。脾虚发热模型的复制方法同上。每周测体重和体温各j次,并观察记录其外观行为变化。于第18天开始每天游泳前各给药组给予相应的中药,其中补中益气汤去柴升组、补中益气汤原方组、补中益气汤大剂柴升组、大剂柴胡升麻组分别按6.30g/kg、6.83g/kg、8.70g/kg、2.52g/kg剂量灌胃,正常组和模型组给予同体积蒸馏水,每天1次,连续5天。第21d各组大鼠灌服10%D-木糖溶液5mL,于代谢笼中收集大鼠5h的尿液,待测D-木糖排泄率。于实验第22天的上午8：00,模型及各用药组大鼠腹腔注射LPS (80μg/kg);正常组注射等量生理盐水。注射同时各中药组分别给与相应的中药灌胃1次,正常组和模型组给予同体积蒸馏水。分别于给药后30min、60min、120min、180min、210min测定各组大鼠肛温,绘制各组平均体温曲线。随后即刻断头取血6ml,其中3mL室温放置,2500rpm离心15min,取血清,冰箱-20℃保存,待测GAS、IL-1β、IL-2、IL-6、T3、T4、TSH;另3mL于管中预置的10%EDTA·Na230μL和抑肽酶40u L,充分混匀,2000rpm离心10min,取血浆,于-20℃保存,待测MTL、SS。按脑图谱以灰结节和视交叉的中点为界定部位,取大鼠下丘脑组织迅速置液氮中速冻固定,30min后放入-80℃冰箱,待测cAMP、PGE2o。结果：与脾虚发热模型组比较,补中益气汤原方组大鼠在活动、情绪、皮毛、饮食、大便等外观行为积分值均降低,体重明显升高；血GAS、MTL和尿D-木糖排泄率、血T3、T4及TSH和IL-1β、IL-2含量均明显升高,SS含量升高；体温显著降低,外周血IL-6含量和下丘脑PGE2、cAMP均明显下降,差异均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。补中益气汤去柴、升组大鼠的外观行为的各指标积分值均见下降,体重升高,血GAS、MTL和尿D-木糖排泄率,血T3、T1、TSH及IL-1β含量均有升高,血SS含量降低；体温升高,外周血IL-6含量和下丘脑PGE2、cAMP均明显升高,其差异均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。补中益气汤大剂柴升组大鼠的外观行为的部分指标积分值下降,体重升高；血IL-1β、IL-2及血T3、T4、TSH、GAS、MTL和尿D-木糖排泄率明显升高,血SS含量降低；体温明显升高,血TL-6含量降低,下丘脑PGE2、cAMP升高,差异均有显著或非常显著性意义(P<0.05或P<0.01)。单纯大剂柴升组的大鼠外观行为各指标积分值升高,体重降低；外周血IL-1β、IL-2及血T3、T4、TSH、GAS、MTL和尿D-木糖排泄率降低,血SS、IL-6含量升高；体温明显降低,下丘脑PGE2、cAMP的含量降低。结果表明,补中益气汤对脾虚发热证模型的脾虚及发热具有良好的防治效用,其退热作用可能主要与降低中枢发热介质PGE2和cAMP的生成有关；补中益气汤去升麻、柴胡方对该模型具有部分改善作用,主要涉及脾虚中的胃肠吸收、代谢及部分免疫功能,但对脾虚发热及其中枢相关介质的变化均无明显作用；补中益气汤加大升麻、柴胡剂量方对模型中的脾虚具有部分改善作用,但对体温反有升高趋势；单纯大剂量柴胡、升麻对脾虚发热模型大鼠的脾虚证无明显改善作用,但有显著的退热作用。结论：补中益气汤具有“健脾退热”的作用,其综合效用与方中升麻、柴胡配用及其剂量的选择密切相关,即不配伍升麻、柴胡,或大剂量配伍升麻、柴胡,全方健脾益气作用不仅减弱,且无退热或有升高体温的作用；原方配伍小量升麻、柴胡的综合效用最佳。单纯大剂量的升麻柴胡配伍虽有一定的退热作用,但没有健脾益气的作用。实验中的补中益气汤及其相关配伍与该脾虚发热证模型均有不同的关联性,其中以补中益气汤原方的关联性最大。本课题成功复制出的气虚发热大鼠模型丰富了中医证候模型的内容,为中医药实验研究提供了新的有用工具。补中益气汤及其不同配伍的效应比较,对于论证补中益气汤方益气退热功用和方中升麻、柴胡及其用量配伍的合理选择提供了实验依据;研究中发现的不同配伍方药作用于同—脾虚发热证呈现不同效应也为理解中医方-证相关的内涵提供了现代药理学理解。